O Seminário Toxicologia

Alterações post mortem no conteúdo de mioglobina nos órgãos

Resumo

Alterações post mortem nas concentrações de mioglobina no sangue e nos órgãos foram investigadas ensaio imunoenzimático por experiências com animais em combinação com coloração imuno-histoquímica de casos humanos. As concentrações de mioglobina no sangue aumentaram drasticamente dentro de um período tempo após a morte. Aqueles no músculo estriado, no entanto, não se alteraram até o dia 14 após a morte.

O conteúdo de mioglobina no fígado e no rim aumentou ligeiramente no dia 5 após a morte, e mais obviamente até o dia 7 ou posterior. No entanto, quase nenhuma alteração foi observada no dia 5 no rim, quando o artéria e veia foram ligadas logo após a morte. Na glândula tireóide e no pulmão, a mioglobina conteúdo aumentou acentuadamente no dia 7 postmortem, com os valores logarítmicos subindo quase linearmente como o tempo após a morte passou. Na glândula tireóide, as concentrações atingiram o nível do estriado músculo. Acredita-se que os mecanismos de aumento da mioglobina post-mortem nos órgãos sejam a difusão direta do músculo estriado e / ou a distribuição pelo sangue. Para estimar o post-mortem intervalo, a determinação do conteúdo de mioglobina na glândula tireóide ou no pulmão parece ser útil.

 

Introdução

Para estimar o intervalo pós-morte, as descobertas macroscópicos das alterações pós-morte são geralmente utilizados. Muitas substâncias bioquímicas utilizadas para este finalidade foram determinadas, e. C3 (o terço componente do complemento) no sangue, potássio em líquido cefalorraquidiano, transaminase glutâmica oxaloacética (GOT) e outras enzimas no líquido pericárdico, e aminoidos livres em humor vreo [1-10].

Wehner et al. relataram as mudanças pós-morte insulina nas células pancreáticas ou tireoglobulina na glândula tireóide usando imuno-histoquímica e referiu-se à possibilidade de estimar o intervalo pós-morte [11, 12]. No entanto, a relação entre observaram os achados morfológicos nos órgãos e concentrações das substâncias-alvo no sangue não foram descritos nestes relatórios anteriores.

A mioglobina é uma hemoproteína que existe em profusão o músculo estriado e apenas um pouco no sangue do corpo vivo. Sabe-se que as concentrações de mioglobina em aumento de sangue extraordinariamente postmortem, e estudos anteriores descobriram que esta substância é exsudado no sangue do músculo estriado após a morte. Embora tenhamos relatado que órgãos como material de autópsia contém apenas uma pequena quantidade de mioglobina em comparação com o músculo esquelético com base na análise qualitativa / semiquantitativa [16], postmortem alterações de mioglobina nos órgãos ainda não foram elucidados em detalhe. No presente estudo, investigamos as alterações post-mortem do conteúdo de mioglobina vários órgãos juntamente com sangue do coração e avaliados a aplicabilidade dessas mudanças ao diagnóstico do intervalo pós-morte.

Materiais e Métodos

Experimentos com animais. Na investigação de alterações pós-morte das concentrações sangüíneas de mioglobina, 3 coelhos machos com aproximadamente 3,000g de peso foram sacrificados usando dióxido de carbono após sangue venoso havia sido tomado. Esses coelhos foram fixados

nas costas e à esquerda à temperatura ambiente. Aproximadamente 0,5ml de sangue no lado esquerdo do coração foi obtido aos 15  min e em 1, 2, 3, 6 e 12h e 1, 3, 5 e 7 dias após a morte.

Investigar o conteúdo de mioglobina em órgãos / tecidos, pequenos pedaços (aproximadamente 1cm3 ) do cérebro, pulmão esquerdo, fígado, rins esquerdo e direito, coração, e músculo longissimus (barriga) foram retirados de um coelho em aproximadamente 30 min e em 1, 3, 5, 7 e 14 dias postmortem. A glândula tireóide foi removida como um órgão inteiro no mesmo curso de tempo. Espécimes de o pulmão e fígado foram retirados da região não coberto por músculo esquelético (por exemplo, diafragma). O renal artéria e veia foram ligados apenas no lado direito imediatamente após a morte. Para cada intervalo pós-morte, cinco coelhos foram utilizados.

Esses experimentos atenderam aos padrões e princípios de cuidado com os animais, e a aprovação ética foi obtida do Departamento de Recursos Animais, Avançado Centro de Pesquisas Científicas, Universidade de Okayama.

Preparação da amostra e determinação do conteúdo de mioglobina no sangue e órgãos. As concentrações de mioglobina foram determinadas usando o

sobrenadante obtido após centrifugação a 20.000G por 10 min (24 ℃) pela enzima desenvolvida internamente imunoensaio modificado para coelho-mioglobina [13, 16].

Para a análise quantitativa de mioglobina em órgãos / de 0,1 g foi removido do pequeno pedaços e homogeneizado com 0,9 ml de tampão fosfato solução salina contendo 1 al de albumina de soro bovino utilizando homogeneizador de ultra-som. Após a centrifugação sob as mesmas condições para o sangue, mioglobina concentrações no sobrenadante foram determinadas e seu conteúdo no órgão foi calculado. Os dados são apresentado como a média ± S.D. no gráfico.

As análises estatísticas foram realizadas utilizando o teste t para comparação entre grupos de acordo com o intervalo pós-morte. As diferenças foram consideradas significativas em p ＜ 0,05.

Investigação histológica de postmortem exsudação de mioglobina. A glândula tireóide foi removido juntamente com os músculos circundantes em 5 casos de autópsia (3 homens e 2 mulheres, autópsia intervalo entre 8h e 2 dias, causas de morte estavam se afogando, perda de sangue, estrangulamento de ligadura,

e fogo). Os espécimes foram fixados em formalina 10 ｵ e incorporado em parafina. Para a detecção de mioglobina, o anticorpo policlonal anti-mioglobina humana e ENVISION ＋ (DAKO) foram utilizados. A detecção de A ligação específica do anticorpo teve sucesso com a diaminobenzidina, e a exsudação post-mortem da mioglobina foi morfologicamente avaliada.

Resultados

Concentrações de mioglobina no sangue do coração esquerdo começou a aumentar logo após a morte e aumentou muito rapidamente. As concentrações foram 20 vezes superiores às em sangue venoso auricular antemortem, que foram apenas 0,0029 -0,0074µg / ml, em 15 min e atingido níveis aproximadamente 6.600 vezes maior no dia 1 após morte (Tabela 1).

O conteúdo de mioglobina nos músculos estriados foi aproximadamente 1mg / g ou mais e quase não mostrou mudar após a morte, exceto entre o dia 0 (dentro de 30 min após a morte) e dia 14 no miocárdio. Em a comparação entre o miocárdio e o músculo esquelético (músculo longissimus), o primeiro continha níveis um pouco mais elevados do que o último (Fig. 1).