Métodos Colorimétricos

As macro e micro moléculas são substâncias encontradas nos tecidos vegetais e são classificadas em aminoácidos, proteínas, açúcares, lipídios, ácidos orgânicos, ácidos nucléicos e pigmentos.

Para se quantificar ou identificar estes grupos de substâncias, normalmente é feito o fracionamento das amostras dos tecidos vegetais e, com base em reações químicas específicas entre o reagente e a estrutura do componente, consegue-se fazer a sua quantificação. Os produtos dessas reações podem ser quantificados por vários métodos, sendo o da colorimetria o mais utilizado.

A colorimetria visa determinar a concentração de uma substância, em condições bem definidas, pela medida da absorção de luz, tomando como referência a absorção da substância numa concentração conhecida. A principal vantagem desse método é de proporcionar um meio simples para determinar pequenas quantidades de substâncias.

Entre os métodos colorimétricos destaca-se a espectrofotometria, um processo analítico sensível, rápido, e cujos resultados são mais precisos, comumente utilizado na determinação da concentração de constituintes biológicos.

A partir da leitura dos valores de absorbância, de soluções padrões de concentrações conhecidas, obtém-se a curva padrão ou curva de calibração. Com esta curva, pode-se determinar a concentração de uma determinada substância presente em uma dada amostra.

A espectrofotometria é fundamental para a pesquisa bioquímica, destacando-se as seguintes situações: (a) se o índice de absorbância a um comprimento de onda específico for conhecido, a concentração de um composto pode ser estimada por meio da determinação de sua densidade ótica naquele comprimento de onda. (b) medindo-se a taxa de formação ou degradação de um composto que absorva a radiação, o curso de uma reação pode ser determinado e (c) compostos podem ser identificados através da determinação de seus espectros de absorção nas regiões visível e ultravioleta de espectro de energia radiante (Passos, 1996).