Furacão Katrina

AULA PRÁTICA: CARACTERIZAÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLEÍCOS

OBJETIVOS:

Extração e caracterização de ácidos nucleicos a partir do tecido da cebola, caracterização do DNA (Reação de Dishe), caracterização do RNA (Reação de Bial), e determinação da presença de carboidratos na solução (Reação de Molisch).

1. EXTRAÇÃO DO DNA DA CEBOLA

Material:

• ½ cebola

• Gral e pistilo

• Tubo de ensaio

• Bastão de vidro

• Álcool etílico gelado

• Detergente neutro

• Béquer

• Funil

• Filtro de café

PROCEDIMENTOS:

• Cortou-se a ½ cebola e transferiu-a para um Gral.

• Amassou-se a cebola com um pistilo.

• Em um béquer juntou-se 4 espátulas de sal (NaCl), 2 espátulas de detergente e 50mL de H2O destilada.

• Adicionou-se a cebola amassada ao conteúdo do béquer e agitou-se levemente com auxílio do bastão de vidro por 5 minutos.

• Colocou-se a solução do béquer em um funil contendo filtro de papel e deixou-se a solução ser filtrada em um recipiente.

• Colocou-se a solução filtrada em um tubo de ensaio e adicionou-se álcool gelado.

1.1 REAÇÃO DE CARACTERIZAÇÃO DO DNA (Reação de Dishe)

• Foram utilizados 2 tubos de ensaio, nomeados como A e B.

• No tubo A foi adicionado 2,0mL de Solução de Ácidos Nucleicos e 2,0mL de Reativo de Difenilamina.

• No tubo B foram adicionados 2,0mL de Água destilada e 2,0mL de Reativo de Difenilamina.

• Logo após a foram transferidos para o banho –maria à 100 °C durante 10 minutos.

2. DETERMINAÇÃO DA ALTERAÇÃO NA VISCOSIDADE DO DNA CAUSADA POR DESNATURAÇÃO

• Adicionou-se 5,0mL da solução de material genético extraído da cebola em um tubo de ensaio.

• Em seguida com uma pipeta graduada de 5mL foi pipetada a solução e cronometrado o tempo de escoamento.

• Logo após foi aquecida a solução no tubo de ensaio em banho – maria fervente durante 10 minutos.

• Ao ser retirado do banho-maria foi cronometrado novamente o tempo de escoamento da solução após o aquecimento.

• Em seguida foi resfriado o tubo por 15 minutos em gelo e novamente pipetado e cronometrado o tempo de escoamento da solução após o resfriamento.

3. REAÇÃO DE CARACTERIZAÇÃO DO RNA (Reação de Bial)

• Foram utilizados 2 tubos de ensaio, nomeados de C e D.

• No tubo C foi adicionado 2,0mL de solução de ácidos nucléicos e 2,0mL de Reativo de Orcinol.

• No tubo D foram adicionados 2,0mL de Água destilada e 2,0mL de Reagente de Orcinol.

• Em seguida foram homogeneizados e levados em banho - maria fervente durante 15 minutos.

• Logo após foram retirados e resfriados a temperatura ambiente e comparados um com o outro.

4. REAÇÃO DE MOLISCH

• Utilizou-se 2 tubos de ensaio, nomeados de E e F.

• No tubo E foi adicionado 2,0mL de solução de Ácido nucleico e 2 gotas de Reativo Molisch.

• No tubo F foi adicionado 2,0mL de Água destilada e 2 gotas de Reativo Molisch.

• Em seguida misturou-se e adicionou-se lentamente 2mL de Ácido sulfúrico concentrado em cada um dos tubos e comparados com os tubos C e D.

RESULTADOS OBTIDOS: