O DNA é um composto orgânico cujas moléculas

UNIVERSIDADE NILTON LINS

CURSO: BIOMEDICINA

TURMA: LBM 034

Graciete Rodrigues de Lima -23006394

Cliciane Santos Rodrigues- 23007052

Gabrielly Ingred Castilho Parente -23005255

Moniki Sibely silva e silva- 23006612

Jackeline Samille Silva de Freitas -23007019

Rafaelly Xavier da Silva -23006653

EXTRAÇÃO DO DNA DA MUCOSA BUCAL

MANAUS, 22/03/2024

INTRODUÇÃO

   O DNA é um composto orgânico cujas moléculas contêm as instruções genéticas que coordenam o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres vivos e de alguns vírus. Os genes do DNA são expressos através das proteínas que seus nucleotídeos produzem com a ajuda do RNA. O RNA é um ácido nucleico responsável pela síntese de proteínas da célula. As várias formas de RNA sintetizam essas proteínas de acordo com as informações contidas no DNA.

   Sobre sua estrutura, o DNA é formado por duas cadeias na forma de uma dupla hélice, que são constituídas por um açúcar, um grupo fosfato e pelas bases nitrogenadas, que podem ser a Citosina, Guanina, Adenina e Timina. A dupla hélice é um fator essencial na replicação do DNA durante a divisão celular, onde cada hélice faz uma cópia de si mesmo. Durante a transcrição do DNA, o RNA é formado.  No RNA, a adenina se liga à uracila, enquanto a citosina se liga à guanina. Como ela é uma molécula de cadeia simples, o RNA dobra-se para se ligar às suas bases nitrogenadas, embora nem todas se associem. O ácido ribonucleico (RNA), diferente do DNA, é geralmente de fita única. Um nucleotídeo em uma cadeia de RNA conterá ribose (o açúcar de cinco carbonos), uma das quatro bases nitrogenadas (A, U, G ou C), e um grupo fosfato.

   RNA mensageiro (RNAm) é um intermediário entre um gene codificador de proteína e seu produto proteico. Se uma célula precisa fazer uma proteína em especial, o gene codificador da proteína será "ligado", isto é, uma enzima RNA polimerase virá e fará uma cópia de RNA, ou transcrição da sequência de DNA do gene. A cópia carrega a mesma informação da sequência de DNA de seu gene. No entanto, na molécula de RNA, a base T é substituída por U. Por exemplo, se uma fita de DNA codificadora tem a sequência 5’-AATTGCGC-3’, a sequência do RNA correspondente será 3’-UUAACGCG-5’.

   Uma vez que um RNAm é produzido, será associado a um ribossomo, uma máquina molecular que é especializada em montar proteínas a partir de aminoácidos. O ribossomo usa a informação no RNAm para fazer uma proteína de uma sequência específica, "lendo" os nucleotídeos de RNAm em grupos de três (chamados códons) e adicionando um aminoácido particular a cada códon.

   O RNA ribossômico (RNAr) ajuda o mRNA a se ligar no local certo para que a sequência de informações possa ser lida. Alguns RNAr também atuam como enzimas, o que significa que eles ajudam a acelerar (catalisar) reações químicas, neste caso, a formação de ligações que unem os aminoácidos para formar uma proteína. Os RNAs que atuam como enzimas são conhecidos como ribozimas.

   RNAs transportadores (RNAt) também estão envolvidos na síntese proteica, mas seu trabalho é agir como carregadores, trazer aminoácidos ao ribossomo, assegurando que o aminoácido adicionado a cadeia é o especificado pelo RNAm. RNAs transportadores consistem em uma fita única de RNA, mas essa fita tem segmentos complementares que ficam juntos para fazer regiões de fita dupla. Esse pareamento de bases cria uma estrutura 3D complexa importante à função da molécula. Estrutura de um RNAt. A molécula geral tem uma forma mais ou menos parecida com um L.

   A Extração de DNA é o primeiro passo na utilização de técnicas moleculares, este processo é essencial para obter a eficiência desejada na amplificação dos protocolos que usam PCR. Quando falamos sobre o processo de PCR, destacamos que a escolha correta do kit é decisiva em relação a sensibilidade de detecção, tempo de espera entre as etapas, falhas de manipulação e resultado. Existem diversas formas de realizar a extração do DNA e RNA, cada maneira é destinada a uma aplicação distinta. São inúmeros métodos estabelecidos a fim de isolar moléculas de DNA a partir de materiais biológicos como sangue, saliva, urina e outros fluidos corporais.

   A extração e purificação de DNA são de importância absoluta para áreas de biotecnologia, médica e forense. Um estudo que permite identificar a causa de doenças genéticas, distinguir e analisar vírus ou bactérias, determinar paternidade e até mesmo criar organismos geneticamente modificados

MATERIAL E MÉTODOS

Os materiais utilizados em laboratório foram:

• 1 copo descartável 50 ml
• Etanol 96º (gelado)
• Solução tampão
• Solução salina em 2m (113g de NaCl/L)
• Bastão de vidro
• Tubo de ensaio
• EDTA (detergente)
• Becker
• Pipeta

       

   A metodologia realizada no laboratório para a extração de DNA da mucosa bucal consistiu na coleta de amostra da saliva de um voluntário ao receber um copo descartável de 50 ml contendo uma solução salina em 2m (113g de (NaCL/L) para realizar um bochecho vigorosamente por aproximadamente 1min e recolher o volume obtido do bochecho no mesmo copo descartável para transferir o conteúdo até a metade para um tubo de ensaio.  

       

    Nesta próxima etapa irá acontecer o processo de Lise celular que é romper a célula para extrair o DNA, onde foi adicionado o EDTA (detergente) ao tubo de ensaio onde vai acontecer a quebra da proteína e da ação superficial da água para liberar o DNA que está preso no núcleo.

 

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   O outro passo é a Precipitação onde o DNA vai se precipitar do álcool. Foi adicionado álcool gelado (Etanol 96º) pelas bordas do tubo de ensaio lentamente até que fosse alcançado pelo menos 1cm de espessura e aguardarmos um tempo de pausa de aproximadamente 1 min. Formou- se uma espuma e um aglomerado de bolinhas e utilizamos um bastão de vidro para homogeneizar lentamente o conteúdo onde se formou uma gosma que é a extração do DNA.