TrabalhosGratuitos.com - Trabalhos, Monografias, Artigos, Exames, Resumos de livros, Dissertações
Pesquisar

O NOCAUTE GÊNICO

Por:   •  23/11/2019  •  Trabalho acadêmico  •  3.082 Palavras (13 Páginas)  •  245 Visualizações

Página 1 de 13

[pic 1]

        

NOCAUTE GÊNICO

Elaboração:

Natália Ingrid Pezzoti

Orientação:

Profa. Dra. Eliane Patrícia Cervelatti

Araçatuba

2018

 

 NOCAUTE GÊNICO

Projeto de pesquisa aplicada, do curso de Engenharia de Bioprocessos, referente à disciplina de Engenharia Genética.

Orientadora: Profª Eliane Patrícia Cervelatti.

Centro Universitário Católico Salesiano Auxilium – UNISALESIANO – ARAÇATUBA.

Araçatuba- SP

2018

ÍNDICE

  1. Introdução............................................................6
  2. Objetivo...............................................................7
  3. Metodologia..........................................................7
  1. Nocaute.........................................................7
  1. Desenvolvimento e Resultados.................................8

4.1. Extração do fragmento de DNA......................................10

4.2. Site de mapeamento genéticos........................................10

4.3. Enzima AvrII........................................................11

4.4. pCU18...............................................................12

4.5. Cultivo em meio de cultura ..........................................13

4.6. Enzimas para as bordas .............................................14

4.7.    Higromicina.........................................................15

4.8. Última enzima (AvrII) ............................................16

4.9 Eletroforese..........................................................17

  1. Conclusão...............................................................18
  2. Referências Bibliográficas........................................18

  1. INTRODUÇÃO

A identificação de sequências de codificação dentro de um genoma e uma análise de produtos gênicos são as próximas fases que levam ao reconhecimento das funções preenchidas pelos genes. A análise da função do gene é uma tarefa para a nova genômica funcional de campo emergente. Existem numerosos métodos para caracterizar as funções dos genes e seu número está aumentando constantemente devido ao progresso mais rápido e rápido da tecnologia e da informatização. O processo de determinação da função de um gene estudado só é possível após a obtenção da sequência e identificação de onde ela é expressa. [1]

É realizado por meio de análises computacionais ou estudos experimentais, associando um gene e um fenótipo relacionado. Várias estratégias e técnicas de pesquisa, tais como predição baseada em homologia, aumento da expressão ou inativação gênica (nocaute) têm sido usadas há muitos anos. O acesso comum às sequências do genoma, que são armazenadas em bancos de dados, permite uma comparação com as sequências estudadas. Uma análise que mostra a similaridade com os genes reconhecidos é útil na determinação inicial de um provável produto gênico e sua função.[1]

O método de previsão através da homologia baseia-se no pressuposto de que, se um gene recém-sequenciado é muito semelhante a um gene já caracterizado e publicado, a função do novo gene é provavelmente semelhante. Neste método, o primeiro passo é comparar o fragmento de DNA estudado com os fragmentos de DNA de organismos modelo disponíveis nas bases de dados de computador. O ADN da maioria dos organismos modelo foi completamente sequenciado e pelo menos parcialmente caracterizado em relação à função do gene. Os maiores e mais populares bancos de dados, nas quais sequências completas de genomas foram armazenadas, estão no servidor do NCBI (Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia). O requisito para o conhecimento das funções dos genes e o desenvolvimento de tecnologias de bioinformática tem levado muitas instituições científicas a se envolverem na catalogação de conhecimento de homólogos conhecidos em bancos de dados. [1]

Com a técnica de "nocaute", hoje é possível alterar o funcionamento de praticamente qualquer gene desde os primeiros estágios embrionários dos animais de laboratório que servem de modelo para entender as principais doenças humanas, como os problemas cardíacos, o mal de Alzheimer e vários tipos de câncer.[1]

  1. OBJETIVO

 De forma didática demonstrar todo o processo de um nocaute gênico, tais como pesquisas, escolhas de enzimas, elaboração e desenvolvimento. Sendo uma forma de colocar em pratica os conhecimentos adquiridos em sala de aula.

  1. METODOLOGIA
  1.  NOCAUTE

Nocaute ou inativação de gênica é uma técnica genética na qual um dos genes de um organismo é inoperante ("eliminado" do organismo). Os nocautes são usados ​​para estudar a função dos genes, geralmente investigando o efeito da perda gênica.

Com isso permite uma comparação do fenótipo obtido do organismo estudado com o fenótipo do organismo não mutado. Com base nisso, podemos determinar quais mudanças ocorreram em um organismo e atribuí-las ao gene não ativo. Um princípio básico desta técnica é gerar e introduzir uma construção genética em um organismo que efetivamente bloqueie um gene específico.

O efeito é a falta de síntese da proteína codificada pelo gene silenciado, que frequentemente resulta em diferenças fenotípicas que podem levar a uma conclusão sobre a função de um dado gene. Uma das técnicas mais comuns de inativação gênica é a sua descontinuação por meio de um fragmento de DNA introduzido artificialmente através da mutagênese insercional (knock-out), que é baseada na recombinação homológica.

A mutagênese de inserção baseia-se em uma inserção do fragmento de DNA de um vetor dentro do gene localizado em um cromossomo. O DNA cromossômico assim obtido contém o gene descontinuado, que não sofre expressão e, com efeito, não há proteína criada. Os distúrbios causados ​​pela falta de proteínas mostram sua função no organismo. O knock-out de genes permite rastrear alterações fenotípicas resultantes da troca de fragmentos de sequência entre o DNA cromossômico e o vetor. O vetor geralmente contém um gene descontinuado por um marcador seletivo permitindo uma identificação de recombinantes e ao mesmo tempo causando uma interrupção do gene e tornando-o inativo. A diferenciação entre células mutadas e não mutadas nem sempre é possível apenas com base em alterações fenotípicas, que podem ser inequívocas.

...

Baixar como (para membros premium)  txt (21.1 Kb)   pdf (1.4 Mb)   docx (973.9 Kb)  
Continuar por mais 12 páginas »
Disponível apenas no TrabalhosGratuitos.com