Microbiologia. Métodos de esterilização

Métodos de esterilização

Em Microbiologia é importante a esterilização de meios, soluções e material

de vidro ou metal que se utiliza. Uma das formas de esterilização obtem-se

através do uso do Autoclave, para grandes quantidades de meios, ou de

uma panela de pressão, para pequenas quantidades de meios. Um produto

é microbiológicamente estéril quando não contem nenhuma forma de

microrganismo vivo. A assépsia é extremamente importante na

microbiologia. Entende-se por assépsia todas as condições, gestos e atitutes

tendentes a manterem o estado de ausência de microrganismos

contaminantes no meio em que actua.

Alguns instrumentos de dissecção como tesouras, pinças podem ser

esterilizadas mergulhando em 70% de alcool (70 ml de etanol absoluto e 30

ml de água destilada).

O material contaminado, por exemplo as ansas que tocaram em cultura de

bactérias, devem ser descontaminados através da chama de um bico de

Bunsen, aparelho igualmente necessário num laboratório de microbiologia.

As bocas de tubos contendo cultura de bactérias, as bocas de frascos de

vidro contendo os meios de cultura, devem sempre que destapados ser

chamuscados á chama do Bunsen.

Meios contaminados com as culturas de bactérias, devem ser

descontaminados por autoclavagem, e em seguida despejados em sacos

plásticos fortes. Placas de petri de plástico com culturas, bem como outro

material de plástico utilizado, devem ser colocados em sacos de plástico e

enviados para incineração. O material de vidro contaminado por sua vez

após autoclavagem deve ser lavado com lexivia e detergente, passado por

água destilada e seco na estufa de secagem.

As pipetas de vidro utilizadas no laboratório deverão ser imersas numa

proveta de plástico grande contendo lexivia ou outro liquido desinfectante,

e posteriormente lavadas e autoclavadas.

As bancadas devem ser esterilizadas passando um líquido desinfectante, e

idealmente o laboratório deve ser isolado, ou então o trabalho deverá ser

realizado dentro de uma câmara de fluxo laminar.

MÉTODOS FÍSICOS

Esterilização por vapor

O vapor quente sob pressão é o método mais usado para esterilização de materiais médico-hospitalares do tipo crítico. É não tóxico, de baixo custo e esporicida. Por esses motivos, deve ser usado para todos os itens que não sejam sensíveis ao calor e à umidade. O calor úmido destrói os micro-organismos por coagulação e desnaturação irreversíveis de suas enzimas e proteínas estruturais. Este tipo de processo é realizado em autoclaves. As autoclaves podem ser divididas segundo os tipos abaixo:

• Gravitacional - O vapor é injetado forçando a saída do ar. A fase de secagem é limitada uma vez que não possui capacidade para completa remoção do vapor. Sua desvantagem é que pode apresentar umidade ao final pela dificuldade de remoção do ar. As autoclaves verticais são mais indicadas para laboratórios. Na venturi, o ar é removido através de uma bomba. A fase de secagem é limitada uma vez que não possui capacidade para completa remoção do vapor. Sua desvantagem é que pode apresentar umidade pelas próprias limitações de remoção do ar do equipamento.

• Alto vácuo - Introduz vapor na câmara interna sob alta pressão com ambiente em vácuo. É mais seguro que o gravitacional devido a alta capacidade de sucção do ar realizada pela bomba de vácuo.

Esterilização por calor seco

Este método é reservado somente aos materiais sensíveis ao calor úmido. Guarda suas vantagens na capacidade de penetração do calor e na não corrosão dos metais e dos instrumentos cortantes, sendo porém um método que exige maior tempo de exposição para alcançar seus objetivos, por oxidação dos componentes celulares. Abaixo, alguns exemplos de temperatura e respectivo tempo de exposição necessário:

Temperatura Tempo

171°C 60 minutos

160°C 120 minutos

149°C 150 minutos

141°C 180 minutos

121°C 12 horas

Pode constar do processo de chamuscar o material á chama do Bunsen, ou

por um periodo prolongado numa estufa a 160oC por periodos de no

minimo 45 minutos. Este tipo de esterilização é utilizado para material de

vidro, para material de dissecção, mas não é muito efectivo contra aquelas

bactérias e fungos que produzem esporos resistentes à secura.

Irradiação e Filtração

Outros métodos de esterilização incluem a irradiação e a filtração. A

filtração é especialmente utilizada para esterilização de meios e soluções.

Unidades de filtração (acetato) que podem ser posteriormente autoclavadas.

Esterilização por calor húmido

Autoclavagem

Faz-se através do autoclave cujo funcionamento é idêntico ao da panela de

pressão sendo a temperatura necessária para esterilizaçao de 121oC, e o tempo de esterilização de cerca de 15 minutos. Este tempo de esterilização

deverá