Relatório de Micro

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CENTRO FEDERAL DE EDUCAÇÃO TECNOLÓGICA DE MINAS GERAIS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

COORDENAÇÃO DE ENSINO TÉCNICO

Laboratório de Microbiologia Industrial II - Turma: QUI2  – T1

Profª Maria Cristina Costa

Data da prática:

Ana Carolina Felício Bicalho

Ana Carolina M. Versiani

Gabriela Alves Moreira  

Isabela Veiga Alves de Quintanilha

Jordana Rodrigues de Farias

Análise da água

Belo Horizonte

Dezembro, 2017

1. Introdução

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2. Metodologia

2.1 Materiais

• Alça de Drigalsky;
• Alça de platina;
• Algodão;
• Amostras de água;

• Béquer;

• Cabo de Kolle;
• Fita crepe;

• Fosforo;

• Frasco de vidro;
• Micropipeta automática;

• Placa de Petri;

• Ponteiras;

• Proveta;

• Suporte para tubos;

• Toalhas de papeis esterilizadas;
• Tubos de Durham;
• Tubos de ensaios.

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2.2 Equipamentos

• Autoclave;
• Balança semi-analítica;
• Bico de Bunsen;
• Estufa incubadora;
• Geladeira;

2.3 Meios de Culturas

• Ágar Eosina azul de metileno;
• Caldo Lactosado;
• Caldo EC;  
• Caldo Verde Brilhante bile 2%;
• Meio VM/VP em caldo;
• Meio citrato;
• Meio SIM.

2.4 Reagentes 

• Álcool 70%;
• Alfa-naftol;
• Sabonete líquido;
• Vermelho de metila;
• Hidróxido de potássio;
• Reativo de Kowask.

2.5 EPI's e EPC's

• Jaleco;
• Luvas;
• Máscara;
• Óculos de proteção ;

2.6 Procedimento

2.6.1 Teste presuntivo 

- Coletou-se a amostra de água;

- Em 5 tubos de ensaio com calco lactosado contendo tubo Durham invertido (concentração dupla) foi adicionado 10 mL da amostra de água coletada;

- Em 5 tubos de ensaio contendo tubo Durham invertido com calco lactosado (concentração simples) foi adicionado 1 mL da amostra de água coletada;

- Em 5 tubos de ensaio contendo tubo Durham invertido com calco lactosado (concentração simples) foi adicionado 0,1 mL da amostra de água coletada;

- Homogeneizou-se as amostras;

-As amostras foram incubadas a 35° C por até 48 horas;

- Após o período de incubação, foi considerado positivo os tubos que apresentaram turvação e bolhas no interior dos turbos de Durham.

2.6.2 Teste confirmativo para coliformes totais

- Transferiu-se uma alçada de cada tubo positivo do teste presuntivo para tubos contendo 10mL de Caldo Verde Brilhante Bile contendo tubos de Durham invertidos.

- Homogeneizou-se e incubou-se a 36ºC por até 48 horas.

- Após o período de incubação, foi considerado positivo os tubos que apresentaram turvação e bolhas no interior dos turbos de Durham.

2.6.3 Teste confirmativo para coliformes termotolerantes

- Transferiu-se uma alçada de cada tubo positivo do teste de coliformes totais para tubos contendo Caldo EC com tubos de Durham invertidos.

- Homogeneizou-se e incubou-se a 44,5ºC por até 48 horas.

- Após o período de incubação, foi considerado positivo os tubos que apresentaram turvação e bolhas no interior dos turbos de Durham.

2.6.4 Provas bioquímicas

- Coletou-se uma alçada do teste presuntivo;

- Transferiu-se uma alçada para uma placa de Petri contendo ágar EAM, pela técnica de esgotamento por estrias;

-Incubou-se por até 48 horas, a 36° C.

 

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Figura 1 Técnica de esgotamento

2.6.4 Provas bioquímicas

- Coletou-se uma alçada de uma colônia típica da placa contendo ágar EAM;

- Transferiu-se um tubo contendo caldo VM/VP para o teste de vermelho de metila;

-Incubou-se por até 48 horas, a 36° C.

- Coletou-se uma alçada de uma colônia típica da placa contendo ágar EAM;

- Transferiu-se um tubo contendo caldo VM/VP para o teste de Voges Proskauer;

-Incubou-se por até 48 horas, a 36° C.

- Com uma alça em agulha coletou-se uma alçada de colônia típica da placa contendo ágar EAM;

- Transferiu-se para um tubo contendo meio semissólido SIM;

- Incubou-se por até 48 horas, a 36° C.

- Coletou-se uma alçada de uma colônia típica da placa contendo ágar EAM;

- Transferiu-se para um tubo contendo meio semissólido SIM;

- Incubou-se por até 48 horas, a 36° C.

2.6.5 Leitura das provas bioquímicas

-  Para o teste bioquímico vermelho de metila, adicionou-se ao tubo 5 gotas de vermelho de metila;

- Coloração vermelha indica resultado positivo.

- Para o teste de Voges Proskauer adicionou-se 0,6 mL de alfa-naftol; 02 mL da solução de hidróxido de potássio a 40%;