Metodos Instrumentais

1-Introdução:

A espectrofotometria é o método de análise mais usado nas investigações biológicas e físico-químicas. O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância. Todas as substâncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertence ao espectro visível. A água absorve fortemente na região do infravermelho. A absorção das radiações ultravioletas visíveis e infravermelhas depende das estruturas das moléculas, e é característica para cada substância química. Quando a luz atravessa uma substância, parte da energia é absorvida (absorbância): a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substâncias se deve à absorção (transmitância) de certos comprimentos de onda da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos aqueles comprimentos de ondas não absorvidos.

2- Objetivo

Conhecer e apresentar as etapas necessárias para desenvolvimento de um método espectrofotômetro de análise. Procedimentos utilizados em analises de varredura.

3- Material e Método

3.1 Material

Espectrofotometro

2 pipetas graduadas 10ml

2 pêras

6 tubos de ensaio

2 cubetas de vidro

Água destilada

Alaranjado de metila (4,0 mg.L) 25ml

Alaranjado de metila (concentração desconhecida) 10ml

1 recipiente para descarte de liquido

3.2 Método

Parte I: Varredura em espectrofotômetro

Ajustou-se o comprimento de onda no aparelho à 415 nanômetros e com o auxílio da pisseta adicionou-se água destilada à cubeta de vidro comcuidado para que o volume adicionado permitisse a passagem pela amostra do feixe de luz emitido no interior do aparelho. OBS: sempre que foi manuseado a cubeta utilizou-se um papel absorvente para eliminar qualquer marca no recipiente que pudesse afetar a análise.

Zerou-se o aparelho e foi adicionado solução de alaranjado de metila à cubeta de vidro e anotou-se o valor da absorbância indicada pelo aparelho.

Em seguida o aparelho foi ajustado nos comprimentos de onda : 445;460;490;520 e 535 e anotou-se as absorbâncias fornecidas pelo aparelho.Com este procedimento foi obtido o pico de absorbância para análise de solução à 460 nanômetros.

Parte II: Construção de Curva de Calibração para análise em espectrofotômetro

Nomeou-se seis tubos de ensaio da seguinte forma:

TUBO B -Adicionou-se 5ml de H2O

TUBO 1 -Adicionou-se 1ml de AM e 4ml de H2O

TUBO 2-Adicinou-se 2ml de AM e 3ml de H2O

TUBO 3-Adicionou-se 3ml de AM e 2ml de H2O

TUBO 4-Adicionou-se 4ml de AM e 1ml de H2O

TUBO 5-Adicionou-se 5ml de AM

Realizado este procedimento o aparelho foi ajustado à 460 nm(valor que foi obtido no procedimento anterior) e adicionou-se a solução do TUBO B à cubeta de vidro.Com o auxílio do papel absorvente limpou-se a cubeta e zerou-se o aparelho novamente para a análise das soluções produzidas anteriormente nos tudos de ensaio.

A cada solução transferida para cubeta foi zerado o aparelho e a cada troca de solução foi feito a limpeza das cubetas com água destilada e papel absorvente para que não houvesse interferência nas análises. As soluções analisadas foram descartadas em um recipiente adequado.Com a realização de todo o procedimento foi obtido o valor de absorbância correspondente e anotado na tabela.

OBS: com a construção da curva de calibração foi obtido a seguinte equação da reta:

Parte III: Análise de amostra desconhecida em Espectrofotômetro

Ajustou-se o aparelho no comprimento de onde de 460nm (valor obtido na I parte) e adicionou-se água destilada à cubeta de vidro com cuidado para que o volume adicionado não interferisse no feixe de luz emitido no interior do aparelho.

Realizou-se novamente o procedimento com o papel absorvente para limpeza da cubeta e zerou-se o aparelho. Logo, adicionou-se a solução AM com concentração desconhecida e anotou-se o valor de absorbância indicado pelo aparelho. Utilizou-se a equação da reta para determinar a concentração do alaranjado de metila.

4-Resultados e discussão:

Parte

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