Dosagem De Carboidratos

Introdução

Um açúcar redutor é um açúcar no qual o carbono da carbonila (anomérico) não está envolvido em uma ligação glicosídica e, portanto, pode sofrer oxidação. Os monossacarídeos podem ser oxidados por agentes oxidantes relativamente suaves, tais como os íons férrico e cúprico. O carbono do grupo carbonila é oxidado a ácido carboxílico (LENINGHER, 1995). Todos os monossacarídeos são potencialmente redutores, devido a presença da carbonila. Outros carboidratos necessitam ser hidrolisados para se tornarem redutores.

O método do DNS é um método onde ocorre a oxidação do grupo carbonila. O oxidante, chamado DNS utiliza o ácido dinitro-salicílico; sal de Rochelle, (solução de tártaro de sódio de potássio) que serve para prevenir o reagente da ação do oxigênio dissolvido; fenol, que é utilizado para aumentar a quantidade de cor produzida; bissulfito, que é um estabilizante da cor obtida na presença do fenol; hidróxido de sódio, que é o redutor da ação da glicose sobre o ácido dinitro-salicílico. Ocorre no método do DNS a seguinte reação de oxidação:

Figura 1: Reação de oxidação da carbonila pelo reagente DNS.

Ocorre neste caso a redução do 3,5-di-nitrosalicitato (de cor amarelo forte) ácido e a oxidação do monossacarídeo, a glicose, formando o 3-amino-5- nitro-salicilato (de cor laranja-marrom forte), na proporção estequiométrica.

Portanto, pela determinação da luz absorvida a 540nm pelo 3-amino-5- nitrosalicilato pode-se determinar a concentração de açúcar redutor presente na solução.

Objetivo

Dosar açúcares redutores por espectrofotometria na faixa do visível.

Metodologia e materiais

Solução padrão de glicose (5μmol/mL)

Solução problema de glicose (80 – 150mM)

Reativo: ADNS (ácido 3,5 – dinitrossalicílico)

Pipetas graduadas de 1 e 10mL

6 tubos de ensaio

Espectrofotômetro

Banho maria a 100 ºC

Construir a curva padrão de glicídios redutores:

Sensibilidade do método químico: 1 a 20µmols de glicose

Seguir o protocolo abaixo utilizando a solução padrão de glicose (5µmol/mL)

Tubo Soludão de glicose (mL) Água destilada (mL) ADNS (mL) Abs 540nm Concentração(μmol/mL)

B -- 1 1,0 0,000 --

1 0,2 0,8 1,0 0,100 1

2 0,4 0,6 1,0 0,271 2

3 0,6 0,4 1,0 0,291 3

4 0,8 0,2 1,0 0,354 4

5 1 -- 1,0 0,545 5

SP 0,1 0,9 1,0 0,890 81

Após a adição dos reagentes, agitar e aquecer a 100ºC por 5 minutos, resfriar e completar o volume para 15mL com água destilada.

Lançar em gráfico as leituras de absorbâncias x concentração de glicídio e determinar o coeficiente angular (ΔAbs/ΔC) e o fator (C/ΔAbs) da reta obtida.

Utilizando a curva padrão obtida, os mesmos reagentes e o mesmo espectrofotômetro, determinar na prática a concentração de glicose em uma solução de concentração desconhecida, sabendo que sua molaridade está na faixa de 80 a 150mM.

Resultados

Cálculo da concentração de glucose da solução problema:

x y 1 x y

1 0,100 1 1 0,100

5 0,545 1 5 0,545

0,1x + 5y + 0,545 - y - 0,545x - 0,5 = 0

-0,445x + 4y + 0,045 = 0

4y = 0,445x – 0,045

y = ax + b

4y = 0,445x – 0,045

4

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