Extração De DNA Da Cebola

INTRODUÇÃO

Todo ser vido consiste de células nas quais está presente O ácido desoxirribonucleico (ADN, em português: ácido desoxirribonucleico; ou DNA, em inglês: deoxyribonucleic acid), que é um composto orgânico cujas moléculas contêm as instruções genéticas que coordenam o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres vivos e alguns vírus. O seu principal papel é armazenar as informações necessárias para a construção das proteínas e RNAs. Os segmentos de DNA que são responsáveis por carregar a informação genética são denominados genes. O restante da seqüência de DNA tem importância estrutural ou está envolvido na regulação do uso da informação genética. Do ponto de vista químico, o DNA é um longo polímero de unidades simples (monômeros) de nucleotídeos, cujo cerne é formado por moléculas de açúcares e fosfato intercalados unidos por ligações fosfodiéster. Ligada à molécula de açúcar está uma de quatro bases nitrogenadas e é a seqüência dessas bases ao longo da molécula de DNA que carrega a informação genética. A leitura destas seqüências é feita através do código genético, o qual especifica a sequência linear dos aminoácidos das proteínas.

A extração de ácidos nucléicos (DNA e/ou RNA) geralmente é a primeira de várias etapas para o estudo da biologia molecular de qualquer organismo.

Com exceção dos ácidos nucléicos derivados in vitro, a primeira etapa envolve a ruptura ou lise das células; a segunda etapa consiste na desnaturação ou inativação de proteínas, tais como as nucleases degradativas. Ácidos nucléicos podem, então, ser separados de macromoléculas através de solubilização em solventes orgânicos, seguida de precipitação por resfriamento, por exemplo.

MATERIAIS E REAGENTES

Materiais:

 Bastão de vidro;

 Becker;

 Manta de aquecimento;

 Funil de filtração;

 Gases;

 Tubo de ensaio;

 Banho de gelo.

Reagentes:

 Cebola;

 Detergente;

 Álcool etílico;

 Cloreto de sódio;

 Água destilada.

 

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

1- Pegou-se cerca de 90g de cebola picada em cubinhos de aproximadamente 5 mm e colocou-se em um becker de 250 ml. A cebola poderia ter sido substituída por banana.

2- Em outro becker preparou-se uma solução contendo 10 ml de detergente comercial, 3 g de NaCl e completou-se com água até 100 ml (misturou-se bem).

3- Misturou-se a solução, a cebola picada e levou-se ao banho-maria a 60ºC, por aproximadamente 15 minutos.

4- Resfriou-se rapidamente a mistura colocando o becker num recipiente com gelo.

5- Após resfriado, filtrou-se a mistura, utilizando gazes.

6- Descartou-se o resíduo e colocou o filtrado num tubo de ensaio. Nesta fase, os ácidos nucléicos extraídos, apresentaram-se com o aspecto viscoso e leitoso.

7- Despejou-se delicadamente álcool comercial, previamente resfriado, sobre o filtrado contido no tubo de ensaio.

8- Fez-se movimentos lentos com o tubo, de forma que os ácidos nucléicos passassem para a fase alcoólica. Na fase alcoólica estes ficaram com aspecto de chumaço de algodão.

9- Com o auxilio de um bastão de vidro fez-se movimentos circulares dentro da solução. Com este procedimento, as longas cadeias de ácidos nucléicos enrolam-se no bastão e são facilmente removidas.

 

RESULTADOS E DISCUSSÃO

No experimento, foi utilizada a cebola, por apresentar grande atividade de divisão celular, facilitando-se a separação das moléculas de DNA e a aparente visualização das mesmas. A utilização do detergente tem como objetivo a lise da membrana da célula que é constituída por fosfolipídios, que são moléculas que se dissolvem em detergente, facilitando o rompimento da célula.

A utilização do NaCl possibilita a precipitação dos ácidos nucleicos em solução alcoólica e favorece a aglomeração das moléculas de DNA. Com a adição do sal, o mesmo dissocia-se me Na+ e Cl- e esses íons interagem com os fosfatos das moléculas de DNA, tornando-as neutralizadas e estabilizadas, mas menos solúveis em água.

A solução é aquecida para aumentar a solubilidade da membrana celular na solução e evitar a ação das enzimas que degradam o DNA (DNAses), pois elas sofrem desnaturação perdendo sua função. Na temperatura de 60° C as enzimas são parcialmente desnaturadas. A posterior colocação do extrato no gelo foi necessária, devido o mesmo diminuir a ocorrência de quebras na molécula de DNA, o que ocorreria se a temperatura fosse mantida por muito tempo. A diminuição brusca da temperatura desfavorece ainda a interação entre as fitas da molécula de DNA, mantendo-as abertas no meio. Logo após a retirada da solução do banho de gelo, realiza-se a filtração com o objetivo de separar a parte sólida (cebola) da fase a ser utilizada.

A adição do etanol (gelado para manter a temperatura do meio) ao filtrado, provoca a precipitação do DNA, pois este possui baixa solubilidade em solventes polares e quanto menor a temperatura menor a solubilidade.

Com auxilio de um bastão de vidro, pôde-se “arrastar” uma quantidade de fita de DNA já que ela estava insolúvel em solução e pôde-se observá-la a olho nu, evidenciando que o processo permite a extração de grande quantidade do ácido desoxirribonucléico.

CONCLUSÃO

A partir deste experimento pode-se fazer a extração de um ácido nucléico (DNA), bem como trabalhar alguns aspectos teóricos do mesmo. Os procedimentos tiveram eficácia na obtenção dos resultados, pois pode-se observar a molécula de DNA a olho nu, onde tal, tem grande importância na herança genética e em diversas pesquisas. Os objetivos foram alcançados com êxito.

 

QUESTIONAMENTOS

1- Qual