RELATORIO Sobre Cromatografia Em Papel

INTRODUÇÃO

A cromatografia é um método físico-químico de separação. Ela está fundamentada na migração diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interações, entre duas fases imiscíveis, a fase móvel e a fase estacionária. A grande variedade de combinações entre fases móveis e estacionárias a torna uma técnica extremamente versátil e de grande aplicação. (WHITE, A; et al)

O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilização é atribuída a um botânico russo ao descrever suas experiências na separação dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de éter de petróleo (fase móvel) através de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de cálcio (fase estacionária), à qual se adicionou o extrato, levou à separação dos componentes em faixas coloridas. Este é provavelmente o motivo pelo qual a técnica é conhecida como cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar à errônea ideia de que o processo seja dependente da cor. (COLLINS, C.H; et al).

Apesar deste estudo e de outros anteriores, que também poderiam ser considerados precursores do uso dessa técnica, a cromatografia foi praticamente ignorada até a década de 30, quando foi redescoberta. A partir daí, diversos trabalhos na área possibilitaram seu aperfeiçoamento e, em conjunto com os avanços tecnológicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticação, o qual resultou no seu grande potencial de aplicação em muitas áreas.

A cromatografia pode ser utilizada para a identificação de compostos, por comparação com padrões previamente existentes, para a purificação de compostos, separando-se as substâncias indesejáveis e para a separação dos componentes de uma mistura. (COLLINS, C.H; et al).

Neste trabalho iremos utilizar a cromatografia em papel uma das técnicas mais simples e que requer menos instrumentos para sua realização, porém é a que apresenta as maiores restrições para sua utilização em termos analíticos. (PERES, T. B., 2002)

OBJETIVO

Identificar aminoácidos através de seu Rf, determinado pela técnica de cromatografia em papel.

AMINOÁCIDOS

Os aminoácidos, também denominados de peptídeos, representam a menor unidade elementar na constituição de uma proteína. Estruturalmente são formados por um grupamento carboxila (COOH), um grupamento amina (NH2) e radical que determina um dos vinte tipos de aminoácidos. (Krukemberghe Fonseca).

Podem ser classificados seguindo dois princípios: pelas propriedades funcionais dos radicais, classificação mais geral; ou pela necessidade de cada organismo, classificação específica ao hábito nutricional conforme a espécie. (Krukemberghe Fonseca).

Pela propriedade funcional: por este critério são diferenciados em apolares (valina, alanina, leucina, triptofano, glicina, isoleucina, fenilalanina, metionina e prolina), polares (serina, tirosina, cisteina, glutamina, treonina e asparagina) e os tipos que acumulam carga positiva ou negativa (ácido aspártico, lisina, arginina, histidina e ácido glutâmico).

Pela necessidade nutricional: É variável de espécie para espécie, obedecendo à capacidade que cada um possui de sintetizar os aminoácidos ou adquiri-los através da alimentação. Para os seres humanos, são subdivididos em aminoácidos essenciais, aqueles que o metabolismo não consegue produzir, e somente pela ingestão de alimentos conseguimos suprir sua carência e aminoácidos não essenciais, sintetizados pelo organismo a partir de outros.

MATERIAIS E REAGENTES

Utilizamos alguns materiais e reagentes como:

01 - Cuba de Cromatografia Ascendente;

01 - Tira de papel whatman n° 1

1 ml - Solução de acido glutâmico a 1mg/ml

1 ml - Solução de lisina a 1mg/ml

1 ml - Solução de leucina a 1mg/ml

03 - Capilares de vidro de 10 cm sem anticoagulante;

01 - Borrifador de vidro

200 ml - Solvente: mistura de n-Butanol: Ácido acético: Água.

Reativo revelador (ninidrina)

PROCEDIMENTO

Etapa 01: Marcar três pontos com lápis de forma bem discreta á 2 cm da borda.

Etapa 02: Com o auxilio de um tubo capilar de vidro aplicamos uma gota de ácido glutâmico (Figura 01) no primeiro ponto indicado no papel, á gota deve estar entre 1 cm de cada gota.

Figura 01. Acido Glutâmico a 1mg/ml.

Etapa 03: Com o auxilio de tubo capilar de vidro aplicamos uma gota de lisina (Figura 2) no segundo ponto indicado no papel.

Figura 02. Lisina a 1mg/ml.

Etapa 04: Com o auxilio de tubo capilar de vidro aplicamos uma gota

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