CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA - CLAE

1. INTRODUÇÃO

O uso de pressões elevadas permite uma redução no diâmetro das partículas da fase estacionária, localizada no interior da coluna cromatográfica. O uso de partículas menores (na ordem de 5,0 µm) no recheio da coluna resulta em uma área superficial, o sítio de adsorção, maior (geralmente da ordem de centenas de metros quadrados por grama de fase estacionária), o que promove uma separação mais eficiente dos componentes da amostra. Essa "miniaturização" das partículas da coluna permite o uso de colunas menores, volumes menores de amostras e um gasto menor de fase móvel. Assim sendo, em cromatografia líquida de alta eficiência trabalha-se na faixa dos microlitros (µL).

A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) é uma técnica analítica usada para separar e quantificar componentes numa mistura líquida. A utilização de suportes com partículas diminutas são os responsáveis pela alta eficiência desse método de cromatografia. A fase móvel (líquida) movimenta-se continuamente através da coluna contendo a fase estacionária (sólido). O soluto interage com as fases estacionária e móvel por adsorção, partição, exclusão molecular, troca iônica. As separações em CLAE podem se dar por adsorção (separação sólido-líquido), partição (separação líquido-líquido) ou ambos. O detector mais utilizado para separações por CLAE é o detector de ultravioleta (absorção da luz na faixa UV – visível), sendo também empregados detectores de fluorescência, de índice de refração, e eletroquímicos, entre outros. O tipo de CLAE mais utilizado é a cromatografia por partição, na qual a fase estacionária é um segundo líquido que é imiscível com o líquido da fase móvel. A cromatografia por partição pode ser subdividida em cromatografia líquido-líquido e cromatografia líquida com fase ligada. A diferença entre as duas está na forma com a qual a fase estacionária é imobilizada nas partículas de suporte do recheio. O líquido é imobilizado por adsorção física em cromatografia líquido-líquido, enquanto é retido por meio de ligações químicas na cromatografia líquida com fase ligada.

2. OBJETIVO

Compreender o estudo sobre a cromatografia líquida de alta eficiência.

3. MATERIAIS E REAGENTES

Sonicador;

Sistema de HPLC;

Metanol;

Água.

4. METODOLOGIA

O método consiste de uma fase líquida (estacionária) que por absorção física é retida na superfície da coluna empacotada geralmente com sílica e de uma fase móvel, também líquida, que passa sobre esta fase estacionária sendo uma destas polar e a outra apolar. A separação baseia-se na solubilidade da amostra em relação ao solvente (fase móvel) e a fase estacionária, sendo assim os componentes da amostra que são mais solúveis na fase móvel são eluídos primeiro enquanto os que têm maior afinidade com a fase estacionária são seletivamente retidos por ela. Assim colocou-se água e metanol no sonicador (cada um em sua proveta) por 30 minutos, depois levou para o sistema de