CaCARACTERIZAÇÃO DE PROTEINAS

FACULDADE CAMPO REAL

ENGENHARIA AGRONÔMICA

LABORATÓRIOS CAMPO REAL

BIOQUÍMICA PRÁTICA

GUARAPUAVA

2013

LUCAS BASÍLIO SLOMINSKI

LUCAS ROMANO ZANLORENSE

MATEUS NEIVERT

MATHEUS DO NASCIMENTO

OSCAR FRITZ NEUMANN NETO

RENATO PADILHA

RELATÓRIO DE BIOQUÍMICA PRÁTICA

AULA 3 : CARACTERIZAÇÃO DE PROTEINAS

Este relatório será entregue na disciplina de Bioquímica Prática, a professora Franciély Ignachewski, para obtenção parcial de nota do primeiro bimestre.

GUARAPUAVA

2013 

INTRODUÇÃO

As proteínas são as moléculas orgânicas mais abundantes e importantes nas células e perfazem 50% ou mais de seu peso seco. São encontradas em todas as partes de todas as células, uma vez que são fundamentais sob todos os aspectos da estrutura e função celulares. Existem muitas espécies diferentes de proteínas, cada uma especializada para uma função biológica diversa. Além disso, a maior parte da informação genética é expressa pelas proteínas. As proteínas pertencem à classe dos peptídeos, pois são formadas por aminoácidos ligados entre si por ligações peptídicas. Uma ligação peptídica é a união do grupo amino (-NH 2 ) de um aminoácido com o grupo carboxila (-COOH) de outro aminoácido, através da formação de uma amida.

São os constituintes básicos da vida: tanto que seu nome deriva da palavra grega "proteios",que significa "em primeiro lugar". Nos animais, as proteínas correspondem a cerca de 80% do peso dos músculos desidratados, cerca de 70% da pele e 90% do sangue seco. Mesmo nos vegetais as proteínas estão presentes.

A importância das proteínas, entretanto, está relacionada com suas funções no organismo, e não com sua quantidade. Todas as enzimas conhecidas, por exemplo, são proteínas; muitas vezes, as enzimas existem em porções muito pequenas. Mesmo assim, estas substâncias catalisam todas as reações metabólicas e capacitam aos organismos a construção de outras moléculas - proteínas,ácidos nucléicos, carboidratos e lipídios - que são necessárias para a vida.

O estudo de aspectos importantes da bioquímica nos leva, invariavelmente, ao estudo de proteínas. Portanto, torna-se importante a existência de métodos adequados de purificação e quantificação destes compostos. A purificação e caracterização de uma proteína baseiam-se em suas características físico-químicas.

OBJETIVO

Caracterizar proteínas em material biológico através de reações colorimétricas e verificar precipitação de proteínas em diferentes condições, correlacionando as observações com estrutura das proteínas.

MATERIAS E MÉTODOS

• Solução de proteinas a 10%

• Solução de ninhidrina 0,1%

• Clara de ovo ´´in natura´´ (pipeta de 5mL)

• Croreto de sódio(NaCl) 1 mol/L

• Hidróxido de Sódio (NaCl) 2,5 mol/L

• Solução de sulfato de cobre (CuSO4) a 1%

• Ácido tricloroacético (TCA) a 10% v/v

• Acetato de chumbo a (PbCH3COO¨) 5% p/v

• Álcool etílico (CH3CH2OH) absoluto (pipeta de mL)

• Solução saturada de sulfato de amônio [(NH4)2SO4]76,6 p/v (pipeta de 5mL)

• 9 tubos de ensaio

• Bastão de vidro

• 6 Pipetas de Pasteur (reagentes)

• Pipeta de 5 mL

Para preparo dos reagentes foram dadas as seguintes recomendações:

1.Solução de proteínas: preparar uma solução de clara de ovo a 10% v/v em solução salina (NaCl 0,9 g/100 mL) ou tampão fosfato 10 mol/L, Ph 7,0.

2.Solução de ninhidrina: pesar 100mg de ninhidrina e dissolver em 100 mL de tampão fosfato 0,01 mol/L, pH 7,0.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Fluxograma:

 Reações de coloração

REAÇÃO DE NINHIDRINA

TUBO 1

2 mL Ninhidrina

1 mL Proteina

TUBO 1

BANHOMARIA

Por 10 min., a 100ºC

Marrom Avermelhado, com corpo de fundo.

TUBO 2

1 mL Proteina a 10%

+ 5 gotas de NaOH 2,5 mol/L

3 gotas de sulfato de cobre a 1%

TUBO 2

Roxo

Com corpo de fundo.

TUBO 3

1 mL de áqua destilada

+ 5 gotas de NaOH 2,5 mol/L

3 gotas