Caracterização De Aminoácidos E Proteínas

Esta experiência foi realizada com o intuito de se analisar determinadas reações com aminoácidos e proteínas. Para tal, recorreu-se a diferentes metodologias: reação de ninidrina, reação de Vogel, reação xantoprotéica e reação do biureto. E, ainda, a agentes desnaturantes de proteínas, como a desnaturação por calor/frio e desnaturação por agentes acídicos (ácido tricloroacético, ácido perclórico e ácido metafosfórico). Estas reações foram feitas usando diversos reagentes, tais como: glicina, cisteína, tirosina, “solução desconhecida”, clara de ovo e água destilada. Todas estas reações fazem com que se obtenham resultados específicos mediante o tipo de reagente utilizado. Na reação da ninidrina, obtiveram-se valores positivos para todos os reagentes à exceção da água destilada que ficou incolor. Na reação de Vogel, obtiveram-se valores positivos para a cisteína que apresentou uma coloração acinzentada e na clara de ovo, com coloração castanha. Na reação xantoproteica, obtiveram-se valores positivos para a tirosina, que ficou vermelha, e para a clara de ovo, que ficou amarelo “torrado”. Na reação do biureto, apesar de se ter obtido várias colorações (levemente azuis em quatro, uma amarela e uma violeta), apenas a clara de ovo deu um resultado positivo. Ao usar agentes desnaturantes de proteínas é possível, igualmente, verificarem-se alterações. Na desnaturação por calor e frio da clara de ovo, não houve e houve desnaturação da proteína, respectivamente. Na desnaturação por agentes acídicos, obtiveram-se resultados positivos em todos os casos, mais era observável qual o ácido que reagia como sendo o desnaturante mais “potente”. Com os resultados obtidos, aferiu-se que existem várias reações que permitem atribuir o estatuto de aminoácido ou de proteína a determinados reagentes, assim como determinar algumas composições de determinados aminoácidos.

Material e Reagentes

Material:

- 26 tubos de ensaio (6 tubos de ensaio por reação + 2 tubos de ensaio para os agentes desnaturantes de proteínas);

- Goblés;

- Pipetas volumétricas (0,5ml e 1ml);

- Pompetes;

- Piano (para tubos de ensaio);

- Material comum de laboratório;

Reagentes:

Reação de ninidrina

- Solução de clara de ovo a 5% (v/v)

- Solução de glicina a 1% (w/v)

- Solução de tirosina a 1% (w/v)

- Solução de aminoácido desconhecido a 1% (w/v)

- Solução de ninidrina a 1% (w/v)

Reação de Vogel

- Solução de clara de ovo a 5% (v/v)

- Solução de glicina a 1% (w/v)

- Solução saturada de cisteína

- Solução de tirosina a 1% (w/v)

- Solução de aminoácido desconhecido a 1% (w/v)

- Solução de NaOH a 40% (w/v)

- Solução saturada de acetato de chumbo

Reação xantoproteica

- Solução de clara de ovo a 5% (v/v)

- Solução de glicina a 1% (w/v)

- Solução de tirosina a 1% (w/v)

- Solução saturada de cisteína

- Solução de aminoácido desconhecido a 1% (w/v)

- Solução de ácido nítrico concentrado

- Solução de NaOH 40% (w/v)

Reação do biureto

- Solução de clara de ovo a 5% (v/v)

- Solução de glicina a 1% (w/v)

- Solução saturada de cisteína

- Solução de tirosina a 1% (w/v)

- Solução de aminoácido desconhecido a 1% (w/v)

- Reagente do biureto

Procedimento

Reação da ninidrina:

1- Prepararam-se seis tubos de ensaio (cinco deles com 2 mL de solução de: glicina, cisteína, tirosina, solução desconhecida e água destilada; o sexto tubo de ensaio continha 3 mL de uma solução de clara de ovo).

2- Adicionou-se quatro gotas de solução de ninidrina aos cinco primeiros tubos de ensaio e 3 mL da mesma solução ao sexto tubo de ensaio.

3- Aqueceu-se, em simultâneo, todos os tubos de ensaio, durante 2 minutos.

4- Registou-se as observações feitas.

Reação de Vogel:

1- Prepararam-se seis tubos de ensaio (cinco deles com 2 mL de solução de: glicina, cisteína, tirosina, solução desconhecida e clara de ovo; o sexto tubo de ensaio continha 2 mL de água destilada).

2- Adicionou-se a todos os tubos de ensaio 2 mL de NaOH 40% (w/v).

3- Aqueceu-se, em simultâneo, todos os tubos de ensaio, durante 2 minutos, em banho maria.

4- Adicionou-se algumas gotas da solução de acetato de chumbo.

5- Registou-se as observações feitas.

Reação do biureto

1- Prepararam-se seis tubos de ensaio (cinco deles com 2 mL de solução de: glicina, cisteína, tirosina, solução desconhecida e clara de ovo; o sexto tubo de ensaio continha 2 mL de água destilada).

2- Adicionou-se a todos os tubos de ensaio 2 mL de reagente do biureto.

3- Registou-se as observações feitas.

Reação xantoproteica

1- Prepararam-se