Espectrofotometria

1 INTRODUÇÃO.

O conhecimento da absorção de luz pela matéria é a forma mais usual de determinar a concentração de compostos presentes em solução. A maioria dos métodos utilizados em bioquímica clínica envolve a determinação espectrofotométrica de compostos corados (cromóforo) obtidos pela reação entre o composto a ser analisado e o reagente (reagente cromogênico), originando um produto colorido. Os métodos que se baseiam nesse princípio são denominados métodos colorimétricos, os quais geralmente são específicos e muito sensíveis. A grande vantagem em utilizar compostos coloridos deve-se ao fato de eles absorverem luz visível (região visível do espectro eletromagnético).

A espectrofotometria medida de absorção ou transmissão de luz é uma das mais valiosas técnicas analíticas amplamente utilizadas em laboratórios de área básica, bem como em análises clínicas. Por meio da espectrofotometria, componentes desconhecidos de uma solução podem ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível, ou infravermelho.

Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma solução com moléculas absorventes, parte da luz é absorvida pela solução e o restante é transmitido. A absorção de luz depende basicamente da concentração das moléculas absorventes e da espessura da solução – caminho óptico.

Beer em 1852 observou a relação existente entre a transmissão e a concentração do meio onde passa o feixe de luz. Uma certa solução absorve a luz proporcionalmente à concentração molecular do soluto que nela encontra, isto é, " A intensidade de um feixe de luz monocromático decresce exponencialmente à medida que a concentração da substância absorvente aumenta aritmeticamente ".

As leis de Lambert-Beer são o fundamento da espectrofotometria. Elas são tratadas simultaneamente, processo no qual a quantidade de luz absorvida ou transmitida por uma determinada solução depende da concentração do soluto e da espessura da solução.

Fazendo-se um gráfico da absorbância (Eixo Y) em função da concentração (Eixo X), obtêm-se uma reta que é chamada de curva padrão, a qual poderá ser utilizado para determinar a concentração de soluções a partir dos valores da absorbância.

2 OBJETIVO

O objetivo do experimento foi através do método espectrofotométrico determinar a concentração de substâncias, medindo-se a absorbância através da luz meio da solução de água destilada e leveduras.

3 METODOLOGIA

3.1 MATERIAIS E REAGENTES:

Materiais: Pipeta de vidro graduada (10ml), Pera para pipetagem, Pipeta de vidro graduada (1ml), 5 Tubos de ensaio de 10 ou 20 ml, Béquer de 25 ml ou 50 ml, Estante para tubo de ensaio, Bastão de vidro, Cubetas para espectrofotômetro, Espectrofotômetro, Balança.

Reagentes: Água destilada, Leveduras liofilizadas.

3.2 PROCEDIMENTOS:

Tarou-se a balança analítica, pesou-se 0,05g de levedura seca e adicionou-se no béquer, dissolveu-se o material em 20 ml de água destilada com auxílio da pipeta graduada(10ml) e pera, agitou-se levemente por dez minutos para hidratar a levedura seca utilizando o bastão de vidro, levou-se ao espectrofotômetro e determinou os valores de absorbância e anotou-se os resultados e calculou-se os valores de leveduras/ml.

4 RESULTADOS E DISCUÇÕES.

Tabela com resultados obtidos através da verificação dos valores de absorbância da solução realizada a partir de água destilada e levedura liofilizada (levedura seca), alguns resultados não foram obtidos com sucesso pois houve uma falha no processo de homogeneização comprometendo sua eficiência, ficando assim substâncias depositadas no fundo da cubeta, logo não foi possível criar um gráfico da absorbância.

AMOSTRAGEM AGUA AMOSTRA COM LEVEDURA ABSORBÂNCIA (A) CONCETRAÇÃO ELEVEDURA/ML

TUBO 1 (BRANCO 2ML 0,0ML 0

TUBO