SEPARAÇÃO DE ORGANELAS E MACROMOLÉCULAS POR CENTRIFUGAÇÃO

INTRODUÇÃO:

Com a fórmula química de C55H72O5N4Mg, a clorofila é o pigmento mais conhecido por sua coloração verde. Apesar de sua fama, não toda planta possui clorofila, apresentando uma coloração verde ou não, isto é porque a clorofila é a responsável pela captação da luz solar que capacita a fase clara da fotossíntese.

A clorofila se encontra dentro de cloroplastos, que são organelas que se apresentam no meio do citoplasma.

Com a introdução de todas as informações, se inicia a pergunta de como podemos obter a clorofila em primeiro lugar, para realizar seu estudo bioquímica, claramente chave para uma melhor compreensão do processo de obtenção de energia fotossintética.

2. MATERIAIS E MÉTODOS:

2.1 MATERIAIS:

Gral e pistilo;

Vinagre;

Detergente de Louça;

Pipetas Pasteur;

Folhas de Tradescantia purpurea;

Centrífuga;

2.2 MÉTODOS:

1° Passo: Quebra física das quatro folhas em vários pedaços e aplicação contínua de pressão para sair um suco, processo de estourar a parede celular.

2° Passo: Adicionar 10 ml de água com vinagre (Água acidulada para diferenciar a cor, pois libera os cloroplastos). Logo depois aplicar pressão por mais 15 minutos..

3° Passo: Colocar o líquido no tubo de centrífuga e levar pra centrifugar por 15s, para separar todas as organelas.

4° Passo: Precipitar é o resto da celulose pegar o líquido (água acidulada com ancitonina) sobrenadante e colocar no tubo de ensaio

5° Passo: Centrifugar o líquido novamente por 5 minutos. Agora o sobrenadante passa a ser a antocianina e o precipitado é o cloroplasto.

6° Passo: Adicionar três gotas de detergente ao cloroplasto e agitar por 1 minuto.

7° Passo: Adicionar uma gota de hidróxido de sódio com água na antocianina. Vai da cor roxa para cor verde.

8° Passo: Centrifugar e estourar o cloroplasto. A clorofila fica no líquido sobrenadante e a membrana no precipitado.

9° Passo: Separação da clorofila

3.0 RESULTADOS E DISCUSSÕES:

3.1 RESULTADOS:

Ao massacrar as folhas de Tradescantia purpurea, está se estourando sua parede celular, liberando, então o líquido do citoplasma. No citoplasma se encontram os plastos que guardam ambas a clorofila e a antocianina, que estarão misturadas. Com consecutivas centrífugações, se consegue separar a antocianina dos cloroplastos e depois se estoura o cloroplasto para poder se obter a clorofila.

Com o experimento, percebe-se que a antocianina e os cloroplastos aparecem em meio ácido (vinagre) enquanto os cloroplastos aparecem em meio básico (hidróxido de sódio). Não só isso, mas que a densidade dos cloroplastos é maior que a da antocianiana, já que a separação usando a centrífuga foi por meio do volume.

3.2 DISCUSSÃO

1. Que método foi utilizado para romper as células?

Para a extração do conteúdo intracelular das células da folha de Tradescantia purpurea foi necessário rasgar a mesma e esmagá-la com um pistilo, esse choque mecânico favorece o rompimento da parede celular com a liberação logo em seguida do citoplasma e