SEPARAÇÃO DE UMA MISTURA DE CORANTES POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

SEPARAÇÃO DE UMA MISTURA DE CORANTES POR

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

CURITIBA

2017

GIANA KIRCHOFF

SEPARAÇÃO DE UMA MISTURA DE CORANTES POR

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

Relatório de laboratório apresentado à disciplina de Cromatografia e Espectroscopia do curso de Farmácia do Setor de Ciências da Saúde da Universidade Federal do Paraná.

Orientador: Profº. Dr. Luiz Pereira Ramos.

CURITIBA

2017

INTRODUÇÃO

A cromatografia em camada delgada (CCD) é um processo físico-químico de separação que está fundamentada na migração diferencial dos componentes de uma mistura através da migração diferencial desses componentes quando arrastados pela fase móvel (líquida) sobre uma camada delgada de absorvente retido em uma superfície plana (fase estacionária – sólida), essa técnica se destaca devido á sua facilidade em efetuar a separação, identificação e quantificação das espécies químicas, que ocorre devido a diferentes interações, entre fases imiscíveis, a fase móvel (que pode ser líquida ou gasosa) e a fase estacionária (que é uma fase fixa dentro da coluna que normalmente pode ser um líquido viscoso ou sólido), quanto mais forte for a interação entre as fases mais facilmente a amostra será removida da superfície de absorvente, o que leva a velocidades diferentes de migração, ocasionando a separação.

PARTE EXPERIMENTAL

Primeiramente foi selecionado um conjunto de seis cromatoplacas preparadas na aula anterior, posteriormente a reativação das mesmas foi realizada conforme previsto.

Por conseguinte, foi eliminado das cromatoplacas o excesso de fase estacionária das laterais e em cada placa, na parte superior, foi desenhada com um lápis ponta fina uma linha medindo 1 cm e também a linha de aplicação da amostra 5 cm abaixo da frente de progressão da fase móvel, realizando o procedimento com cuidado e delicadeza.

Com ajuda de um capilar foi feita a marcação que consiste em quantidades equivalentes de cada corante (corantes utilizados: amarelo de metila (AM), mistura problema: vermelho de metila (VM) e negro de sudan (NS)). Foi realizado um teste de concentração com a mistura problema, que continha amarelo de metila a mistura problema contendo: vermelho de metila e negro de sudan sobre uma das cromatoplacas e usando um tubo capilar de diâmetro apropriado, foi feito três aplicações equidistantes entre si, acrescentando um aplicação no meio através do capilar nas paredes da cromatoplaca (tocar rapidamente o capilar com amostra , evitar manchas grandes) com amarelo de metila logo depois foi acrescentando uma aplicação do mesmo em cada lado (esquerdo e direito) e realizando a mesma sequência esquerda e direita a aplicação contendo amarelo de metila (AM) a mistura problema: vermelho de metila (VM) e negro de sudan (NS) sendo aplicado a mesma sequência nas cinco cromatoplacas.

Após o teste de concentração e as aplicações nas cromatoplacas foi transferido com o auxílio de um pinça para as cubetas de vidro, tampávamos e dentro das cubetas contia o suficiente para não atingir o ponto de aplicação das diferentes fases móveis, esperava-se até o tempo em que o corante migrava até a linha superior traçada com um lápis no período de 15 ou 30 segundos até que tivesse sido concluído, quando a fase móvel atingiu a frente de progressão do solvente, foi retirado a cromatoplacas das cubetas e deixado evaporar. Foi anotado o tempo transcorrido desde o início da corrida cromatográfica. Foram utilizados diferentes reagentes para melhor analisar os efeitos de polaridade e calcular os Rf’s.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Figura 1: Resultado observado após exposição a diferentes solventes. Da esquerda para a direita: cicloexano; cicloexano acetato de etila 30/70; cicloexano acetato de etila 10/90; acetato de etila; clorofórmio.

A análise qualitativa de uma substância é realizada através da cor da mancha e de seu fator de retardamento, Rf, determinado através da expressão:

Rf = da / ds

Rf = fator de retenção;

da = distância (cm, mm) percorrida pela substância;

ds= distância (cm, mm) percorrida pela fase móvel.

Os valores obtidos das distâncias percorridas pelos solventes e pela amostra problema de acordo com cada componente.

TABELA 1

Fase móvel Componentes Da Ds Rf Tempo da corrida

CICLOEXANO AM 0,0 cm

5,00 cm 0 8 minutos

NS 0,0 cm 0

VM 0,0 cm 0

AMP 0,0 cm 0

ACETATO DE ETILA – CICLOEXANO

(10:90, v/v) AM 2,5 cm

5,00 cm 0,5 12 minutos

NS 1,0 cm 0,2

VM 0,4 cm 0,08

AMP 2,8 cm 0,56

ACETATO DE ETILA – CICLOEXANO (30:70, v/v) AM 3,0 cm

5,00 cm 0,6 10 minutos

NS 1,3 cm 0,26

VM 1,0 cm 0,2

AMP 3,3 cm 0,66

ACETATO DE ETILA

AM 5,0 cm

5,00 cm 1 8 minutos

NS 5,0

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