Relatorio de Circuito RC

Materiais Utilizados

• Lâmina;
• Régua;
• Contador de colônias;
• Álcool 70;
• Papel absorvente macio;
• Suporte para tubo de ensaio;
• Lamina;
• Óleo de cedro (óleo de imersão);
• Copo descartável;
• Pipetador;
• Espátula de metal;
• Duas placas de Petris com PCA;
• Agitador;
• Tubo de ensaio com água peptonada;
• Béquer para descarte;
• Palito de fósforo;
• Alça de platina;
• Alça de Drigalsky;
• Pipeta esterilizada de 1mL;
• Bico de Bunsen;
• Balança semi-analitica;
• Incubadora à 36ºC;
• Microscópio Óptico;
• Pinça de madeira;
• Água de torneira;
• Corante cristal violeta;
• Corante fucsina;
• Lugol;
• Cronômetro.

 

Procedimento Experimental

 Primeiramente colocamos uma das placas de Petri para coleta de ar em um determinado lugar próximo ao laboratório. Logo em seguida coletamos terra também nas proximidades do laboratório com a ajuda de uma espátula de metal e um copo plástico.

Esperamos 15 minutos para buscar a placa que ficou exposta ao ar livre, tampou-se a placa de Petri e colocou-a na incubadora a 36°C. Enquanto isso pesamos 2g de terra numa balança semi-analítica, tarando primeiramente apenas com o copo plástico. Depois adicionamos essas 2g de terra dentro do tubo de ensaio com água peptonada com o auxílio da espátula de metal e levamos o tubo para o agitador até que a solução ficasse homogênea, porem sobrou apenas um pequeno corpo de fundo de areia.

Então esterilizamos a Alça de Drigalsky, mergulhando-a no álcool 70 e em seguida no Bico de Bunsen, flambando-a. Em seguida esperamos o resfriamento em meio estéril, próximo ao Bico de Bunsen. Com as mãos previamente esterilizadas com álcool 70, utilizamos uma pipeta esterilizada e com o auxilio de um pipetador,  pipetou-se 0,1ml do contido dentro do tubo de ensaio e colocou-o na placa de Petri reservada para o solo logo em seguida foi espalhado o conteúdo com a Alça de Drigalsky.

Foi levada a Placa de Petri do solo para a incubadora a 36 ºC. As duas placas de Petri permaneceram na incubadora durante 48 horas.

Na segunda parte do experimento, fez-se a contagem das colônias. Para as bactérias do solo dividiu-se em quatro partes iguais, e foi contado em um contador de colônias apenas uma das partes e depois  multiplicou por quatro. Aa bactérias do ar foram contadas normalmente com o auxilio do contado de colônias. Logo após esterilizamos a alça de platina, mergulhando-a no álcool 70 e em seguida no Bico de Bunsen, flambando-a. Depois resfriamos em meio estéril, próximo ao Bico de Bunsen e então fizemos a raspagem das colonias do solo e do ar e com o auxilio de uma pinça de madeira fixou-as nas lâminas com chama.

Depois de  fixar as bactérias presentes na amostra. Cobriu-se a lamina com cristal violeta, deixando o corante agir por cerca de dois minutos, então retirou-o d a lamina com um filete de água. Depois a lâmina foi coberta com lugol e deixou-o agir por aproximadamente um minuto, lavou-se o lugol com um filete fino de água corrente; adicionou-se álcool sobre a lamina até descora-la, então a lamina foi coberta com fucsina e deixou-a agir por trinta segundos, lavou-se a lamina com água corrente e então a secou levemente com papel absorvente macio.

Depois de preparar a lamina com a técnica de coloração de Gram, fez-se a observação das bactérias presente no solo e no ar em um microscópio óptico. Primeiramente fez-se as observações da lamina em uma lente de 40X, depois com a lente de 100X, depois com a de 400X e por fim fez-se a observação na lente de 1000X, no entanto foi necessário colocar uma gota de óleo de cedro sobre a amostra. Depois de fazer a observação limpou-se a lente de 1000X com papel absorvente macio para retirar o óleo de cedro. Após o experimento, toda a vidraria e amostras utilizadas devem ser depositadas em um béquer para descarte, para em seguida serem esterilizadas.