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EFEITO HIPERCRÔMICO

A desnaturação de ácidos nucleicos é acompalhado por um aumento da absorvância no comprimento de onda a 260 nm. Este aumento de absorvância é denominado por “Efeito hipercrômico”, o qual deve-se à separação das bases de cadeias complementares. Esta separação (desnaturação) permite uma maior absorção de fotões de radiação ultravioleta pelas orbitais  das bases, que já não se encontram “emparelhadas” com as respectivas bases complementares. Existem vários métodos para promover a desnaturação de ácidos nucleicos, nomeadamente por aquecimento, aumento de pH, métodos químicos (por ex., utilização de formaldeído que promove a formação de bases Schiff, as quais, por sua vez, impedem a formação de pontes de hidrogénio), adição de formamida e abaixamento da força iónica. No entanto, o método mais utilizado é indubitavelmente através do aumento da temperatura da amostra do ácido nucleico.

O gráfico a seguir mostra a temperatura de desnaturação (Tm), o qual está ligado à estabilidade térmica da molécula de ácido desoxirribonucleico (DNA) em estudo. Mandel & Marmur (1968) determinaram que esta estabilidade é directamente proporcional ao número de pares guanina – citosina (G-C) de uma dada molécula de DNA. Tm corresponde à temperatura à qual 50 % das moléculas de um dado ácido nucleico se encontram desnaturadas (Fig. 1).