A Estrutura, Propriedade e Funções de Biomoléculas

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC

Bioquímica: Estrutura, Propriedade e Funções de Biomoléculas

RELATÓRIO DA PRÁTICA 1

Espectrofotometria - Conceitos e Aplicações

  Profª Dra. Elizabete Campos de Lima

                                                             

  Evandro Pereira Nunes Júnior             11084416

  Giovanni Gomes Zanardi               11202020550

  Giovanni Lucca Fernandes Reis    11202020856

  Gustavo Menezes Fernandes         11202131442

  Leonardo Ribeiro Nunes                 11202130458

Santo André - SP

2023

1. Procedimento

 Medidas quantitativas obtidas pela Espectrofotometria Visível da Albumina Biureto

        a) Para obtenção da curva padrão de albumina-Biureto, identifique os tubos de ensaio com os valores das concentrações das soluções-padrão de albumina fornecidas, inclusive a desconhecida e o “branco”. Coloque 0,5 mL de solução de cada concentração em seu respectivo tubo e acrescente 1 mL de água destilada. Após agitação manual delicada, adicionar 1,5 mL do reagente de Biureto e tornar a agitar. Após 5 minutos, no ESPECTROFOTÔMETRO DE BANCADA, fazer a leitura da absorbância de cada solução no λ de 550 nm, em ordem crescente de concentração e lendo a amostra desconhecida após a concentração de 80 μmol.L-1 (20, 40, 60, 80, desconhecida, 140, 160, 180, 200 μmol.L-1 ).

 b) ATENÇÃO, obter o “branco” com uma solução de água+biureto ( 1,5 mL de água destilada + 1,5 mL de Biureto ) e fazer a leitura da absorbância desta solução no início da série de leituras espectrais.

c) Anote atentamente o valor de absorbância de cada solução na tabela abaixo.

Tabela 1 - Valores de absorbância das diversas soluções de água+biureto

Padrão de albumina (μmol.L^-1 )	Padrão de albumina (mol.L^-1)	Absorbância em 550 nm
Branco		0
20	2×10-5	0,067
40	4×10-5	0,121
60	6×10-5	0,180
80	8×10-5	0,241
100	1 ×10-4	0,298
120	1,2 ×10-4	0,235
140	1,4 ×10-4	0,287
160	1,6 ×10-4	0,339
180	1,8 ×10-4	0,370
200	2 ×10-4	0,410

Amostra desconhecida

0,348

1. Análise de dados

a) Plotar as absorbâncias das soluções padrão em função da concentração e calcular a absortividade.

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Cálculo da Absortividade

A = a.b.c

Usando como referência o padrão de albumina de concentração 2×10^-5 mol/L, obtém-se:

0,067 = a.1.2×10^-5 mol/L

0,067 / 2×10^-5 = 3350

a = 3350

        Utilizando o mesmo método acima para os demais itens, obtemos as seguintes absortividades:

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A = Absorbância

a = absortividade

b = caminho óptico (cm)

c = concentração (mol/L)

b) Determinar a concentração da amostra desconhecida.

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