MATERIAL PARA EXTRAÇÃO DO DNA EM DIFERENTES MATERIAIS BIOLÓGICOS

Aula Prática: MATERIAL PARA EXTRACÇÃO DO DNA EM DIFERENTES MATERIAIS BIOLÓGICOS

Objectivo: Extrair, por princípios básicos, o DNA a partir de células do epitélio bucal e de diversas fontes vegetais.

INTRODUÇÃO

O material genético dos seres vivos (DNA) é uma molécula responsável pelo armazenamento e transmissão das características de um ser vivo, bem como pelo controle directo ou indirecto de vários processos que ocorrem em um organismo. O isolamento do DNA é um processo de extracção que pode ser realizado em células de diferentes espécies e através de diferentes tipos de amostras utilizando vários métodos. Cada um desses métodos é destinado a aplicações distintas (determinação de paternidade, fins diagnósticos ou para a prática de PCR). 

Geralmente, num laboratório de ensino, seguem-se as seguintes etapas: Trituração do tecido; Lise das membranas celulares com detergente; solução salina, para libertar os ácidos nucleicos e as proteínas; Digestão das proteínas por acção enzimática de proteases; Precipitação com etanol gelado. O DNA é solúvel em álcool, mas torna-se insolúvel na presença de sal (NaCl), porque o sódio neutraliza a carga negativa dos grupos fosfatos. O etanol formará uma camada na superfície por ser menos denso que a solução aquosa; O DNA surgirá em agregados moleculares, de consistência mucóide, na interface entre a solução aquosa e o álcool. 

Diferentes métodos têm vários efeitos sobre a extracção de DNA, mas possuem a mesma finalidade: separar o DNA presente do núcleo das células de outros componentes celulares, purificando o material para realizar uma análise adequada.

MATERIAL

• 120 ml de Álcool Etílico a 99% (O etanol deve ser colocado no congelador, em frasco fechado, pelo menos um dia antes da realização da prática)
• 160 ml de Detergente de loiça incolor
• 60 g de NaCl (Sal)
• Corante azul de metileno
• Água
• Becker
• Tubos de ensaio
• Colheres de metal
• Bastões ou varetas de vidro
• Liquidificador (alternativa: saco de plástico transparente)
• Papéis de filtro (alternativa: 4 coadores de cozinha)
• Provetas ou pipetas

Dra. Isabel Buange