Métodos De Fracionamento Celular

Os métodos de fracionamento celular consistem na separação e isolamento de diversos componentes celulares, para seu posterior estudo através de técnicas bioquímicas ou de biologia molecular. Eles se baseiam essencialmente na homogeneização dos tecidos e na destruição dos limites celulares por meio de diferentes procedimentos mecânicos ou químicos, com posterior separação das frações subcelulares, de acordo com sua massa, superfície e peso específico (DE ROBERTIS, 2003)

Um dos métodos mais utilizados é o método de fracionamento por centrifugação, este processo permite que as organelas das células sejam separadas de acordo com sua densidade. Com a utilização de uma centrifuga as células são submetidas a rotações com que fazem que a força centrífuga exercida sobre as células, rompa as membranas celulares e agrupam as organelas de acordo com sua densidade.

A técnica de centrifugação fracionada consiste em uma série de centrifugações com velocidades gradativamente maiores. As maiores organelas ou inclusões e mais densas são sedimentadas primeiro, e o sobrenadante de cada centrifugação é retirado e novamente centrifugado com uma velocidade maior. E assim ocorre a separação de cada componente da célula. No final de todo o processo o sobrenadante que permanece é denominado fração solúvel. Todo esse processo só é possível devido a utilização da centrifuga, um aparelho que usa a força centrifuga para separar partículas de acordo com suas densidades.

CROMATOGRAFIA

É um método físico-químico de separação. Ela está fundamentada na migração diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interações, entre duas fases imiscíveis, a fase móvel e a fase estacionária. A grande variedade de combinações entre fases móveis e estacionárias a torna uma técnica extremamente versátil e de grande aplicação. O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilização é atribuída a um botânico russo ao descrever suas experiências na separação dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de éter de petróleo (fase móvel) através de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de cálcio (fase estacionária), à qual se adicionou o extrato, levou à separação dos componentes em faixas coloridas. Este é provavelmente o motivo pelo qual a técnica é conhecida como cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar à errônea idéia de que o processo seja dependente da cor. Apesar deste estudo e de outros anteriores, que também poderiam ser considerados precursores do uso dessa técnica, a cromatografia foi praticamente ignorada até a década de 30, quando foi redescoberta. A partir daí, diversos trabalhos na área possibilitaram seu aperfeiçoamento e, em conjunto com os avanços tecnológicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticação, o qual resultou no seu grande potencial de aplicação em muitas

áreas. A cromatografia pode ser utilizada para a identificação de compostos, por comparação com padrões previamente existentes, para a purificação de compostos, separando-se as substâncias indesejáveis e para a separação dos componentes de uma mistura.

ELETROFORESE

A técnica consiste em submissão de uma solução

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