Desnaturação da proteina
Por: deborah5667 • 9/6/2015 • Trabalho acadêmico • 657 Palavras (3 Páginas) • 1.198 Visualizações
- INTRODUÇÃO
2 OBJETIVOS
Verificar o efeito de alguns fatores sobre a solubilidade de proteínas. Como:
- Calor;
- Adição de solvente orgânica (etanol);
- Adição do sulfato de amônio;
- Uso de metais pesados (cloreto de mercúrio);
- Uso da caseína como determinante isoelétrico.
- METODOLOGIA
3.1 Precipitação pelo calor;
- Pipetamos 1 ml da solução de clara de ovo a 10% no tubo de ensaio.
- Aquecemos o tubo de ensaio e, banho-maria de água em ebulição por 5 minutos.
- Observamos e anotamos os resultados.
3.1.1 Precipitação por solvente orgânico
- Pipetamos 1 ml da solução de clara de ovo a 10% no tubo de ensaio.
- Adicionamos 1 ml de etanol absoluto.
- Observamos e anotamos os resultados
3.1.2 Precipitação por sulfato de amônio
- Pipetamos 1 ml da solução de clara de ovo a 10% no tubo de ensaio.
- Adicionamos 3 ml de sulfato de amônio saturado.
- Observamos e anotamos os resultados.
- Adicionamos 4 e 5 ml de água destilada.
- Observamos e anotamos os resultados.
3.1.3 Precipitação por metais
- Pipetamos 1 ml da solução da clara do ovo a 10% no tubo de ensaio.
- Adicionamos 1 ml de Cloreto de mercúrio 0,01M.
- Observamos e anotamos os resultados.
- Adicionamos nesse precipitado gotas de ácido clorídrico 0,05M e observamos os resultados.
3.1.4 Precipitação isoelétrica da caseína
- Pipetamos 1 ml de soluções de caseína a 0,5% em um tubo de ensaio.
- Adicionamos HCL 0,05% mol/L, gota a gota, agitando o tubo após cada adição, até que a precipitação ocorra.
- Observamos e anotamos os resultados.
Para determinar, grosseiramente, o valor do ponto isoelétrico da caseína, adicionamos gotas do indicador verde bromocresol e comparamos a cor do precipitado com a tabela de viragem do indicador abaixo.
Verde de bromocresol pK= 4,7
- pH ácido (< 3,7): amarelo
- pH transição (3,7 – 5,7): verde
- pH alcalino (> 5,7): azul
3.1.5 Precipitação de proteínas por ácidos
- Pipetamos 1 ml da solução de clara de ovo 10% em um tubo de ensaio.
- Adicionamos 1 ml de ácido tricloroacéticos (TCA) 10%.
- Observamos e anotamos os resultados.
4 RESULTADO
Ao ser empregado o calor como processo de desnaturação da proteína (albumina) observamos que com a elevação da temperatura provocou a quebra das pontes de hidrogênio de forma complexa, onde se notou que seu líquido tornou-se esbranquiçada, diminuído a solubilidade.
A adição de solvente orgânico (etanol) interage com a solubilidade da proteína por mediação de ponte de hidrogênio, quando adicionados em soluções aquosas levam a precipitação das mesmas.
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