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PROPRIEDADES DE HEMOGLOBINA VARIANTES MILWAUKEE-I E SUA CARACTERÍSTICA ÚNICA

Por:   •  2/2/2017  •  Artigo  •  3.319 Palavras (14 Páginas)  •  561 Visualizações

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BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA BBA 35420

PROPRIEDADES DE HEMOGLOBINA M, VARIANTES MILWAUKEE-I E SUA CARACTERÍSTICA ÚNICA

RESUMO

As propriedades físico-químicas de Hb M Milwaukee-I (a2f1267GIu) foram estudadas em comparação com outras variantes de Hb M e Hb Sydney (a2f1267Ala). Utilizando o sangue do doente contendo espectros de Hb M Milwaukee-i: EPR com foram revelados sinais de alto spin-tipo que se assemelhavam aos de Hb M Saskatoon indicando que o resíduo de ácido glutâmico em E ii tem um efeito sobre o heme ferro analo-goso para o resíduo de tirosina em E7.

Num estudo de equilíbrio de 0 2, Hb M Milwaukee-I mostrou uma diminuição do heme-heme, 1,4-1,6 em termos de valor de n, e este valor parecia ser dependente em pH ou temperatura. Embora a afinidade para 0 2 fosse tão baixa quanto cerca de 60 mm Hg de Ps0 a pH 6,5, o efeito Bohr foi nitidamente presente nesta Hb M, e sua magnitude foi maior que a da Hb A. O efeito da temperatura na afinidade 0 2, no entanto, foi significativamente menor neste Hb M do que o observado em Hb A.

Em contraste com Hb Sydney, Hb M Milwaukee-I foi tão estável como Hb A em um calor de desnaturação, refletindo o efeito estabilizador da ligação intramolecular entre o ferro heúrico férrico eo resíduo de ácido glutâmico substituído no conjunto molécula.

INTRODUÇÃO

Um grupo de hemoglobinas anormais, que agora são categoricamente conhecidas como Hb M (ref. I), foi encontrada em muitas partes do mundo. A maioria deles tem sido identificado como uma das seguintes quatro variantes de lib M; Hb H Iwate (a287Tyr / ~ 2) (Ref. 2), Hb M Hyde Park (a2f1292Ty r) (ref. 3), Hb M Boston (a258Tyrf12) (ref. 4) e Hb M Sas-katoon (A2 / ~ 263Ty R) (Ref. 4). Estas hemoglobinas M apresentam uma anormalidade proximal ou histidina distal das subunidades a ou fl da molécula de Hb e têm a mesmo tipo de substituição de aminoácidos, histidina com tirosina. Nós estudamos as propriedades físico-químicas dessas hemoglobinas M.

Biochim. Biophys. Acta, 194 (1969) 6-I5


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PROPRIEDADES da hemoglobina M

Evidência que sugere a natureza inequívoca das subunidades a e / 5 em

Hb-molecule 5. Uma quinta variante de Hb M, Hb M Milwaukee-i, foi descoberta nos EUA e, e verificou-se que nesta Hb M o local e o tipo de substituição de aminoácidos foi diferente de outras variantes de Hb M; Valina em 6 7/5 (E II), uma posição quatro resíduos ou uma volta helicoidal distante da histidina distal, foi substituída por ácido glutâmico a. Este relatório trata das propriedades físico-químicas de Hb M Milwaukee-i, especialmente com espectroscopia, equilíbrio e estabilidades, e discutirá a significância dos resultados em comparação com outras variantes de Hb M e Hb Sydney (A2 / 5267Ala) (Ref. 7)

MATERIAIS E MÉTODOS

Amostra de sangue inteiro de um paciente heterozigótico possuindo Hb M Milwau-Kee-I foi gentilmente fornecido pelo Dr. AV Pisciotta com a ajuda do Dr. J. Wittenberg e o Dr. HM Ranney.

Os glóbulos vermelhos obtidos a partir deles foram lavados com soro fisiológico e foram então hemolisadas por adição de água destilada e tolueno. Hb M Milwaukee-eu era isolado na forma oxi (HBO H Milwaukee-I 2; -O2 a2Fe2 + / + 52Fe3 Glu) da hemodepressão lisado por cromatografia numa coluna Amberlite CG-5 o. A cromatografia foi realizado a 4 ° com o uso de tampão de fosfato de potássio oi M (pH 7,0). Depois de a efusão completa de Hb A normal fora da coluna com o tampão, Hb M Milwau-Kee-I foi eluído com solução de NaCl 0,5 M. As Hb M e Hb A resultantes foram dialisadas contra um tamp� apropriado.

Seguiram-se os procedimentos para o estudo das propriedades físico-químicas propriedades de Hb M Milwaukee-I. A determinação dos espectros de EPR foi realizada usando o EPR de Japão Eléctron Espectrômetro modelo JES 3 BX. Os espectros EPR foram registados a uma temperatura de líquido nitrogênio ou hidrogênio líquido, eo campo magnético foi medido por ressonância de prótons na água. A desoxigenação foi realizada por evacuação repetida e introdução de gás nitrogênio no tubo de amostra EPR. Todos os espectros visíveis foram medido com um espectrómetro de registo Cary, Modelo 14, à temperatura ambiente (23-25 ​​°). A análise de equilíbrio de 02 foi realizada utilizando o método de registro automático AIDAA et ai. 8 a 20 ° e a 564 m #, a menos que designado de outra forma. Velocidade de sedimentação

As medições foram feitas com o analisador de ultracentrífuga Hitachi, Modelo UCA-IA; e todos os procedimentos para experiências de estabilidade foram realizados como descrito anteriormenteS, 9.

As concentrações de Hb foram medidas pelo método da piridina hemochromogen 1 °, supondo o emi a 556 mp para ser 34,7-

RESULTADOS

Características Espectroscópicas

Espectros de EPR do sangue do doente e do Hb M Milwaukee-z purificado na Fig. I, o espectro EPR do sangue do doente contendo Hb M Milwaukee-I é apresentado, em comparação com o de Hb M Saskatoon e MetHb A. É devido a o ferro heme férrico no anormal / 5 subunidades de Hb M.Milwaukee-i. O espectro é essencialmente o mesmo que o do Hb Milwaukee-I purificado. 


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Morrer

FIG. I. Espectros EPR do sangue do paciente contendo Hb M Milwaukee-I (superior), do paciente sangue contendo Hb M Saskatoon (meio) e do MetHb A purificado (inferior). O espectro é semelhante ao do sangue do paciente contendo Hb M Saskatoon, exceto para a absorção em torno de g = 4,3 de Hb M Saskatoon. Há um sinal de duplicação G = 6,0, que é uma característica comum ao sangue do paciente contendo Hb M 11,12. A extensão da divisão do valor de g, entretanto, foi a mais proeminente entre as cinco variantes de Hb M (Tabela I). No meio do sinal de dupleto, houve uma pequena absorção semelhante à de Hb M Saskatoon, cujo valor g é 6.05 e corresponde à de MetHb A. Nos campos magnéticos superiores, também, uma absorção foi observada em g = 1,95.

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