Relatório de Atividades Desenvolvidas Durante o Estágio Curricular Supervisionado

Quais os testes realizados?

- PCR (Proteína C Reativa)

- ASO (Antiestreptolisina O)

- FR    (Fator Reumatoide)

- VDRL

- Testes Imunocromatograficos (β-HCG, DENGUE, SIFILIS, HIV, HBsAg)

- HEMOGLOBINA CLICADA

- COMBS DIRETO E INDIRETO

TIPAGEM SANGUINEA e Fator RH

Descreva cada técnica utilizada.

-Para PCR, ASO e FR a técnica é igual, utiliza-se 20 µl do soro do paciente e 20 µl do reagente, e pipeta-se para a placa com fundo preto, mistura os dois, leva ao homogeneizador e deixa homogeneizar por de 3 a 5 minutos, após a homogeneização faz-se a leitura.

-Para o VDRL precisa-se do Soro ou plasma, livre de hemólise, lipemia e contaminação. Em caso de necessidade, as amostras podem ser conservadas no máximo por 4 a 6 semanas a -20 C. 

Pipeta-se 50 µl das amostras nas cavidades da placa escavada e pingar uma gota, que seria 20 µl da do reagente do VDRL nas mesmas cavidades das amostras. Não é necessário misturar esses dois componentes. Deixar Agitar a placa durante 4 minutos no homogeneizador. Imediatamente após os 4 minutos, observar ao microscópio.

- Para o teste imunocromatografico de HIV. Remover o teste da bolsa de alumínio e usá-lo o mais rápido possível. Melhores resultados serão obtidos se o ensaio for realizado no prazo de até uma hora após a coleta.

 Colocar o teste em uma superfície limpa, plana e seca. Para soro, plasma ou amostras de sangue total por punção venosa: Transferir 1 gota de soro, plasma ou sangue total (cerca de 25 μL) para a cavidade de amostra (S) do teste, depois adicionar 1 gota de tampão diluente (cerca de 40 μL) e iniciar o cronômetro. Para amostras de sangue total por punção digital: Tubo capilar: Encher o tubo capilar até a marcação e transferir de cerca de 25 μL de amostra de sangue total por punção digital para a cavidade de amostra (S) do teste, depois adicionar 1 gota de tampão diluente (cerca de 40 μL) e iniciar o cronômetro. Aguardar até a(s) linha(s) colorida(s) aparecer(em). O resultado deve ser lido em 15 minutos. Não interpretar os resultados após 20 minutos! O resultado só é valido se aparecer a linha do controle, caso não apareça, descarte o teste e o refaça com outra placa-teste.    

- Para o teste imunocromatografico de DENGUE: Remover a placa-teste da embalagem e usar imediatamente. Coloque a placa-teste em uma superfície limpa, plana e seca. Adicionar 5µl da amostra no espaço destinado para esta. Adicionar 3 gotas (100µl) da solução diluente no orifício em forma de círculo destinado para esta. Fazer a leitura dos resultados entre 20 e 25 minutos. Não considerar resultados lidos após 25 minutos. O resultado só é valido se aparecer a linha do controle, caso não apareça, descarte o teste e o refaça com outra placa-teste.    

- Para o teste imunocromatografico de HBsAg: Remover o dispositivo de teste do sachê laminado e usar imediatamente. Usando a pipeta, aspire e adicione 100 µl de amostra no poço de amostra da placa-teste. O dispositivos de teste não deve ser movido até que o teste tenha corrido completamente e esteja pronto pra leitura. Esperar 30 minutos e depois leia o resultado. O resultado só é valido se aparecer a linha do controle, caso não apareça, descarte o teste e o refaça com outra placa-teste.    

- Para o teste imunocromatografico de β-HCG: Remover o teste da embalagem selada e colocá-lo diretamente numa superfície não absorvente, e o usar o quanto antes.

Para a amostra de soro e urina, submergir a tira de teste na amostra até a metade da área destinada, durante 13 segundos com as setas voltadas para baixo, aponta para a amostra. Não submergir a tira teste até a indicação da linha MAX. Em seguida retire a fita teste da amostra e coloca-la sobre uma superfície limpa, plana e seca. Aguarda 5 minutos. E fazer a leitura do teste. Não ler as resultados após 10 minutos. O resultado só é valido se aparecer a linha do controle, caso não apareça, descarte o teste e o refaça com outra placa-teste.

- Para o teste imunocromatografico de SÍFILIS: Remover a tira-teste da embalagem e usar imediatamente. Transferir aproximadamente 50 µl da amostra na base de amostra da tira-teste. Pode ser utilizadas amostras de soro, plasma ou sangue total. Dispensar 1 gota (aproximadamente 40 µl), da solução diluente na base da tira-teste. Fazer a leitura dos resultados entre 10 e 15 minutos. Não considerar. Resultados lidos após 30 minutos. O resultado só é valido se aparecer a linha do controle, caso não apareça, descarte o teste e o refaça com outra tira-teste.

- Para o teste de hemoglobina Glicada utiliza-se sangue total com EDTA. Para preparar o hemolisado, é adicionado no tubo de ensaio, 50 µl de sangue total e 500 µl hemolisante, em seguida, homogeneizar e aguardar 5 minutos. Depois homogeneizar por inversa (antes de adicionar o hemolisado). Tubo com tapa vermelha adicionar 100µl do hemolisado; Tubo com tampa cinza adicionar 20 µl do hemolizado. Homogeneizar ambos os tubos por inversão, 5 minutos ou mais, 10 segundos a cada minuto. Levar a centrifugar de 3 a 5 minutos. Pipetar 1000 µl do sobrenadante do tubo vermelho diretamente para a cube do espectrofotômetro e determinar sua absorbância e fazer o mesmo com o tubo cinza. Depois calcular a porcentagem da hemoglobina glicada do paciente.

- No teste do COMBS DIRETO: é pipetado para um tubo de ensaio 500 µl do sangue total e 2 ml de solução fisiológica para lavagem, que é feita por três vezes; em um tubo de ensaio pipeta-se 50 µl do lavado de hemácias e 950 µl de solução fisiológica para a diluição; em outro tudo é pipetado 50 µl da diluição e adiciona 2 gotas do soro anti-humano. Em seguida centrifugar por um minuto, e fazer a leitura.

- No teste do COMBS INDIRETO: Colocar em tubo de ensaio 50 µl de suspensão de hemácias O RH positivo. Adicionar 100 µl gotas do soro a ser testado. Existem dois controles um positivo e outro negativo, onde é adicionado no controle positivo uma gota do reagente anti-D e no controle negativo uma gota de solução salina. Adicionar na amostra 2 gotas de Albumina bovina 22% e incubar em banho-Maria  por 15 minutos a 37°. Depois lavar as hemácias do tubo por 3 vezes com solução salina. Centrifugar a 4.000 rpm por 1 minuto e Desprezar o sobrenadante. Em seguida acrescentar 2 gotas do Soro de Coombs (Soro anti-IgG). Misturar bem e Centrifugar a baixa rotação (1000 rom) por 15 segundos e proceder a leitura.

- No teste de TIPAGEM SANGUINEA DIRETA: É adicionado 500 µl do sangue total em um tubo de ensaio, lavar as hemácias 3 vezes com solução salina, homogeneizar e centrifugar a 3.000 rpm por 1 minuto. Em outro tubo de ensaio, preparar a suspensão de hemácias a 5%, adicionando 950 µL da solução salina e acrescentar 50 µL das hemácias lavadas e Homogeneizar. Identificar 3 tubos para a tipagem sendo A, B e D. Colocar em cada tubo 20-50 µL da suspensão e adicionar 2 gotas dos anticorpos monoclonais (Anti-A, Anti-B, Anti-D respectivamente) e Homogeneizar. Centrifugar a 3.000 RPM por 1 minuto e Proceder à leitura.