O ESPECTROFOTOMETRIA E COLORIMETRIA

Universidade Federal de São Carlos[pic 1]

Técnicas Básicas de Laboratório

ESPECTROFOTOMETRIA E COLORIMETRIA

Determinação do espectro de absorção do corante azul de bromofenol e construção de curva padrão

 Aula 10

TURMA B, GRUPO 6

Bruna Stefane Rodrigues Coelho, 758992;

Gabriel Graeser Macedo, 761875;

Genaro Joele Alves de Moraes, 758736;

Kauê Cavalli, 760626;

Lucas Tobias Barbalho, 759462;

Mayara de Lima Prates, 759000.

Profa. Dra. Lisandra Marques Gava Borges

São Carlos – SP, 28 de junho de 2018.

Sumário

1. INTRODUÇÃO

A espectrofotometria é um método quantitativo laboratorial, utilizado na indústria e no meio acadêmico-científico, a fim de mensurar a concentração de soluções. Em suma, utiliza as propriedades de reflexão e absorção de energia eletromagnética dos átomos ou moléculas para calcular suas concentrações.

A espectrofotometria tem fundamentação teórica na Lei de Lambert-Beer, que afirma: "A concentração de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz absorvida ou inversamente proporcional ao logaritmo da luz transmitida."

Alguns conceitos são fundamentais para se compreender o processo de análise espectrométrica, são eles:

A) Radiação eletromagnética: forma de energia que se propaga em velocidade altíssima: c=2, 998x108m. S-1. Têm comportamento de onda, mas também pode ser considerada partícula já que transmitem pequenos pacotes de energia denominados fótons. Têm frequência (f) e comprimento de onda (λ) variados, o que chamamos de espectro eletromagnético

B) Espectro eletromagnético: engloba todo tipo de radiação eletromagnética. Variam a frequência e, portanto, seu comprimento de onda. A espectrofotometria de absorção realizada na prática foi realizada na região de luz visível. As faixas estão listadas a seguir (fig. 1):

[pic 2]

(Figura 1 – Espectro eletromagnético, SKOOG, 2001)

C) Transmitância: é a taxa de radiação transmitida pela solução (P0/P). Muitas vezes se usa o conceito de percentagem de transmitância. T x 100%

D) Absorbância: taxa de radiação absorvida pela solução. É inversamente proporcional de forma logarítmica em relação à transmitância. A = -log T = -log P0/P.

E) Curva padrão de uma substância: relação padronizada entre a concentração de uma solução e sua absorbância.

O espectrofotômetro é o aparelho utilizado no processo. Ele é composto por 5 componentes: (fig.2)

1. Fonte de energia radiante
2. Seletor de comprimento de onda
3. Amostra
4. Detector de radiação
5. Unidade de leitura do sinal

[pic 3]

(Figura 2. - Os componentes do espectrofotômetro, SKOOG 2001)

2. OBJETIVOS

O objetivo do experimento realizado era a familiarização com as técnicas, formas de preparo e execução para a realização da espectrofotometria, elaboração de gráfico para definir qual comprimento de onda otimiza a absorbância do azul de bromofenol e a elaboração de uma curva padrão dessa substância, para que posteriormente fosse estimado a concentração da substancia desconhecida.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 Materiais

• Água destilada;
• Amostra de Azul de bromofenol;
• Pipeta de 250µL;
• Pipeta 1000µL;
• 2 Cubetas;
• Tubos;
• Espectrofotômetro;
• Pisceta.

3.2 Métodos

Parte A

A partir dos dados oferecidos pela equipe técnica a respeito da varredura do azul de bromofenol 8µg/mL, foi elaborado um gráfico de absorbância/comprimento de onda (nm).

O respectivo gráfico foi analisado para se obter o maior comprimento de onda.

Parte B

A curva padrão foi construída a partir da medição da absorbância de seis amostras com concentrações previamente estabelecidas:

• Amostra 1: 2,5µg/mL;
• Amostra 2: 5 µg/mL;
• Amostra 3: 6 µg/mL;
• Amostra 4: 7,5 µg/mL;
• Amostra 5: 8 µg/mL;
• Amostra 6: 10 µg/mL.

Cada amostra foi preparada por um grupo. Sabendo da concentração inicial da solução estoque de azul de bromofenol (250 µg/mL) e o volume final da amostra além da concentração final requerida utiliza-se a seguinte formula:

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