O Ensaio Antioxidante

Ensaio antioxidante

A análise deve ser feita com a menor quantidade de luz possível, o balão volumétrico com a solução de DPPH deve estar coberto com papel alumínio o tempo todo para proteger a solução da luz. A concentração e o volume da solução de DPPH são fixos, em cada frasco são adicionados 2,7 ml desta solução. O volume final será de 3 ml portanto os outros 0,3 ml será da amostra diluída (solução mãe + solvente). A solução mãe é preparada com uma concentração elevada para que se proceda as diluições para as concentrações desejadas.

Concentração da solução mãe: 10.000 mg/L;

O volume total da solução mãe será 2.000 µl, para tanto devem ser pesados 20 mg do extrato bruto:

C = m/v  → 10.000mg/L = m/0,002 L  → m = 20 mg

O solvente a ser utilizado para preparar a solução mãe pode ser o metanol ou hexano, pois tanto um quanto o outro não tem faixa de absorção na região do UV próximas a do DPPH por isso não irão interferir na análise.

As concentrações das amostras serão de: 1.000 mg/L, 500 mg/L, 200 mg/L, 100 mg/L e 50 mg/L, e a analise deve ser feita em triplicata. Abaixo estão os volumes de solução mãe e solvente a serem utilizados para cada concentração. Para o controle deverão ser utilizados os 2,7 ml de DPPH e 300 µl de solvente. Para o branco deverá ser utilizado 100 % do solvente.

Concentração	1.000 mg/L	500 mg/L	200 mg/L	100 mg/L	50 mg/L
Solução mãe	300 µl	150 µl	60 µl	30 µl	15 µl
Solvente	---	150 µl	240 µl	270 µl	285 µl

Os volumes de solução mãe e solvente são colocados nos frascos onde completa-se o volume de 3 ml com a solução de DPPH. Cada frasco deve ficar em repouso (no escuro) por 30 minutos, esse tempo deve ser rigorosamente respeitado por isso acrescenta-se a solução de DPPH em cada frasco com um intervalo de tempo entre eles, assim ao serem analisados deve-se seguir a ordem com que foi adicionado o DPPH. É recomendado um intervalo de 1 a 2 min entre um frasco e outro, para os frascos de mesma concentração, e um intervalo de 3 a 5 min entre os frascos de concentrações diferentes, pois as cubetas do equipamento devem ser lavadas quando houver a mudança de concentração. A análise é feita em espectrofotômetro no comprimento de onda de 517 nm.

Materiais necessários

• Micropipetas
• Ponteiras (limpas e secas)
• 16 frascos (3 para cada concentração e 1 para o controle) (limpos e secos)
• Balões volumétricos para a solução mãe e solução de DPPH
• Papel alumínio
• Béquer para descarte

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