MÉTODOS DE COLORAÇÃO PARA VISUALIZAÇÃO DE BACTÉRIAS

MÉTODOS DE COLORAÇÃO PARA VISUALIZAÇÃO DE BACTÉRIAS

1 COLORAÇÃO DE GRAM

1.1 Características Gerais:

- Método mais usado em Bacteriologia, que permite a diferenciação da maioria das bactérias em dois grandes grupos, de acordo com a constituição de suas paredes celulares:

• Gram-positivas: espessa camada de peptideoglicano, ácidos teicóicos e polissacarídeos.
• Gram-negativas: fina camada de peptideoglicano, lipoproteínas e uma membrana externa, a qual é composta por fosfolipídios, proteínas e lipopolissacarídeos.

- Exemplos de bactérias Gram-positivas:

• Cocos: gêneros Staphylococcus e Streptococcus.
• Bacilos: gêneros Corynebacterium, Listeria, Bacillus e Clostridium.

- Exemplos de bactérias Gram-negativas:

• Cocos: gêneros Neisseria e Veillonella.
• Bacilos: gêneros Escherichia, Salmonella e Vibrio.

- Não pode ser utilizado para a visualização de:

• Micoplasmas (bactérias sem parede celular);
• Micobactérias (possuem muitos lipídios insolúveis na parede celular);
• Espiroquetas (têm estrutura muito fina e pouco permeável aos corantes).

1.2 Fundamentação Teórica do Método:

- Inicialmente, cobre-se a lâmina contendo o esfregaço bacteriano com corante cristal violeta e lugol, formando o complexo cristal violeta-iodo (CVI).

- Em seguida, trata-se a lâmina com álcool (ou álcool-acetona), que extrai os lipídios da parede Gram-negativa, resultando na remoção do complexo CVI e, consequentemente, descoramento das bactérias Gram-negativas. Já as Gram-positivas, em virtude da sua espessa camada de peptideoglicano, permanecem coradas em roxo ou azul escuro.

- Por fim, utiliza-se o corante fucsina, que tinge de vermelho ou rosa as células bacterianas descoradas na etapa anterior.

2 COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN

2.1 Características Gerais:

- É utilizada para visualização de bactérias álcool-ácido resistentes (BAAR), como as micobactérias Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium leprae.

- As BAAR não se coram pela técnica de Gram, pois sua parede celular é formada por uma espessa camada lipídica, rica em ácidos micólicos.

2.2 Fundamentação Teórica do Método:

- Inicialmente, o esfregaço bacteriano é coberto com o corante fucsina, corando todas as bactérias em vermelho.

- Em seguida, a lâmina é lavada com uma solução de álcool e HCl a 3%, fixando a fucsina nos lipídios das paredes das BAAR, que permanecem com coloração vermelha. Porém, nas bactérias que não são álcool-ácido resistentes, a fucsina não consegue se fixar, sendo retirada das células durante a lavagem.

- Por fim, o corante azul de metileno é adicionado, tingindo de azul as bactérias que não são álcool-ácido resistentes, enquanto as BAAR não são afetadas pelo corante em questão.