O Amido - Proteínas

O amido é um dos principais compostos de reserva de energia. Pode ser utilizado em todos os níveis tróficos, mantendo um papel importante cadeia alimentar nos ecossistemas. Por este motivo, diversos organismos adquiriram ao longo da evolução,a capacidade de gerar enzimas que catabolisam o amido com posterior liberação de glucose e uso no metabolismo energético. (ZEEMAN et al. 2004)

Referencias

Zeeman, S.C., Smith, S.M. & Smith, A.M. 2004. The

breakdown of starch in leaves. New Phytologist 163:

247-261.

Resumo

Para demonstrar a hidrólise ácida e enzimática do amido, são utilizados métodos de coloração com reagentes DNS e Lugol. Sendo necessário que a solução seja aquecida para as reações ocorram banho-maria, desta forma o amido é convertido em glicose como produto final e obtendo como produtos intermediários dextrinas e oligossacarídeos.

A coloração ideal obtida é gradual crescente nos tons de amarelo/laranja/vermelho para o método DNS de determinação de açucares redutores (glicose) e tons de azul/roxo para o método com Lugol (pigmentação das dextrinas).

Métodos

Inicialmente foi pesado 1 g de amido com auxílio de um vidro de relógio. Em seguida, o amido foi vertido em um béquer de 150ml contendo 20 ml de água destilada, em seguida, foi adicionado 70ml de água destilada fervente, após homogeneizar, foi adicionado 10ml de água destilada fria para completar o volume de 100ml. Desta solução, à frio, foram retiradas, com uma pipeta de 1,0 mL, duas alíquotas de 0,2 mL e transferidas para dois tubos de ensaio 10x150 mm. Estes foram o tempo zero de hidrólise.

Posteriormente, a suspensão de amido foi posta sob aquecimento de 80° C. Com ajuda de um bastão de vidro, a suspensão foi homogeneizada, de minuto a minuto, nos cinco primeiros minutos. Logo após estes, foram retiradas duas alíquotas de 0,2 mL e transferidas para um tubo de ensaio 10x150 mm. Este procedimento foi repetido após dez, vinte e quarenta minutos de aquecimento.

As alíquotas de cada tempo de hidrólise foram divididas em duas partes. À primeira parte dos tubos foram acrescentados 1,3 mL de água destilada e 1,0 ml do reativo DNS

Discussao

Na experiência com o reagente Lugol, foi observado que no primeiro tubo (0) a coloração ficou em um tom de cinza, no tubo (1) ocorreu uma coloração azul escuro, no tubo (3)houve coloração em tons de preto, com mudança brusca da coloração, e nos últimos tubos ( 4 e 5) a coloração observada foi em tons de preto com cor bem forte, notando-se pouca diferença entre o tom dos dois últimos tubos.

Hidrólise ácida

A solubilidade dos carboidratos depende da disponibilidade dos grupos hidroxila para formar ligações de hidrogênio com a água. No caso dos polissacarídeos, a solubilidade é baixa devido à grande quantidade de ligações de hidrogênio, fato que minimiza a interação com a água. A solubilização só é obtida por meio da hidrólise ácida.

Teste Lugol

- tempo 0

Após a retirada da alíquota e a adição do Lugol ocorreu mudança de cor do branco do sistema ácido/amido para o amarelo com tons de verde causada pela formação do complexo amido-ácido. Este complexo é formado quando moléculas de iodo ajustam-se dentro da estrutura da amilase. A formação deste complexo é um indício de que há presença de amido.

- tempo 5

Depois do aquecimento da solução de suspensão de amido por 5 minutos, adicionou-se três gotas de Lugol à alíquota retirada, e observou-se que a solução adquiriu uma coloração com tonalidade verde. Fato que se deve a complexação de amido com lugol.

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