Determinação enzimática da Bromelina
Por: JOAOPAULOM • 7/9/2017 • Trabalho acadêmico • 518 Palavras (3 Páginas) • 391 Visualizações
Acadêmicos: Bruna Gabrieli de Godoy Martins; Cleiton Marques da Silva; Fernanda Kelly Mezzalira; João Paulo Martins Miranda
Disciplina: Enzimologia Aplicada
Bromelina – Determinação Enzimática
Bromelina
A bromelina é um aglomerado de isoenzimas proteolíticas que se encontram em vegetais pertencentes a família Bromeliaceae, como o abacaxi. É uma enzima pertencente a classe das hidrolases e aplicada a diversos setores, todos fundamentados em sua atividade proteolítica, sendo utilizada em medicamentos digestivos e também como amaciantes de carnes.
Empregada na área da saúde a bromelina atua no organismo através de três funções principais:
- Ação mucolítica: Desfazendo o muco ou catarro dos pulmões, favorecendo uma limpeza que facilita a excreção e também auxilia o trânsito intestinal.
- Anti-inflamatório: Descongestionando a circulação, especialmente se o edema surgir por batida de acidente.
- Digestão: Atuando no estômago, devido a bromelina ser uma enzima que desempacota proteínas alimentares, favorecendo e acelerando a digestão pesada.
Obtenção das amostras e extrato bruto
Para a obtenção do extrato bruto da bromelina utiliza - se como matriz o abacaxi, o qual é higienizado e preparado a polpa da casca, sendo as amostras cortadas em cubos e utilizadas no processo.
Em uma concentração de 100g de amostra / 100 mL de tampão é adicionado tampão fosfato 1,0 M e pH 7,5. A mistura é homogeneizada em liquidificador durante três minutos, e o pH do meio é ajustado para 7,5 com NaOH 1,0 M, sendo posteriormente a mistura filtrada.
Atividade enzimática
A atividade proteolítica da bromelina é estabelecida segundo o método de Kunitz (1947) e Walter (1984), utilizando como substrato caseína a 2,0 % (m/v) em tampão fosfato 0,1 M (pH 7,5).
Em um tubo contendo 2,5 mL de solução de caseína adiciona-se 0,2 mL de amostra (extrato contendo a enzima), sendo esta incubada a 37 °C por 10 minutos e posteriormente a reação interrompida pela adição de 5 ml de ácido tricloroacético (TCA). Este processo promove a precipitação do substrato não hidrolisado e o conjunto é deixado em repouso por 10 minutos em temperatura ambiente.
Em seguida o material é centrifugado a 2000 rpm, e a quantidade de peptídeos solúveis em TCA, ou seja, o material não precipitado, é determinada a 280 nm contra um branco do substrato e da amostra.
Para a análise quantitativa é usado um padrão de tirosina, contendo 5 pontos, caracterizados por 3 mM, 2 mM,1 mM, 0,5 mM, e 0,25 mM de tirosina.
Desta maneira, uma unidade de atividade enzimática corresponde à quantidade de enzima capaz de variar em uma unidade a leitura de absorbância a 280 nm, gerando a expressão da atividade enzimática em unidades de enzima por mL de extrato bruto.
Referências Bibliográficas
ABÍLIO, G. M. F.; et al. Extração, atividade da bromelina e análise de alguns parâmetros químicos em cultivares de abacaxi. Revista brasileira de fruticultura. Vol. 3. N°4. Jaboticabal. Dez. 2009.
KUNITZ, M. Crystalline soybean trypsin inhibitor: II general properties. Journal of General . Physiology, v. 30, p. 291-310, 1974.
TEIXEIRA, J.B. P. Programa de plantas medicinais e terapias não-convencionais. Disponível em: http://www.ufjf.br/proplamed/atividades/fitoterapia/2157-2/.Acesso em set. 2017.
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