O DNA Vegetal

RESUMO

O presente relatório apresentará o processo de extração do DNA vegetal da banana e da cebola, utilizando uma solução de lise, composta por água, sal e detergente líquido, que age diretamente nas células dos materiais biológicos invadindo sua estrutura e facilitando o processo de extração. Ainda, foram utilizadas temperaturas altas e baixas para facilitar o processo de extração, bem como o álcool para a formação de solução uma alcoólica que viabiliza a precipitação do DNA na solução. Os resultados da prática foram satisfatórios, possibilitando a extração do DNA para a análise.

 

SUMÁRIO

1) INTRODUÇÃO E REVISÃO BIBLIOGRÁFICA (valor 2,0 pontos) 4

2) OBJETIVOS DA AULA PRÁTICA (valor 1,0 pontos) 5

3) MATERIAIS E MÉTODOS (valor 2,0 pontos) 5

3.1 Materiais 5

3.2 Métodos ou Procedimentos 5

4) RESULTADOS E DISCUSSÕES (valor 3,0 pontos) 8

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS (valor 0,5 pontos) 10

 

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Banana picada e macerada. 6

Figura 2 - Cebola picada e macerada. 6

Figura 3 - Cebola e banana macerados e misturados na solução lise. 6

Figura 4 - Solução de banana sendo filtrada. 7

Figura 5 - Adição de álcool (92%) na solução. 7

1) INTRODUÇÃO E REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

O DNA (ácido desoxirribonucleico) é uma molécula complexa que carrega as instruções genéticas para o desenvolvimento, funcionamento, crescimento e reprodução dos organismos vivos. Sua estrutura consiste em duas cadeias de nucleotídeos que formam uma dupla hélice. Cada nucleotídeo possui uma base nitrogenada (adenina, timina, citosina ou guanina), um açúcar (desoxirribose) e um grupo fosfato. Ele contém desoxirribose, uma pentose que se diferencia da ribose por ter uma hidroxila a menos. [1]

Elementos contaminantes como polifenólicos e terpenóides, liberados durante a lise celular, têm a capacidade de aderir permanentemente ao DNA. Esse fenômeno impede tanto a quebra do DNA pelas enzimas de restrição quanto sua amplificação por PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Adicionalmente, o rompimento da célula leva à liberação de polissacarídeos, que são complicados de separar do DNA e, consequentemente, inibem diversas DNA polimerases e enzimas de restrição distintas. [4]

A descoberta e identificação do DNA como o material genético fundamental das células são atribuídas ao bioquímico suíço Friedrich Miescher. Em 1869, Miescher isolou uma substância a partir dos leucócitos (células brancas do sangue) encontrados no pus. Ele chamou essa substância de "nucleína" na época, pois ela foi isolada do núcleo das células. A descoberta de Miescher foi fundamental para o avanço do nosso entendimento sobre a genética e, eventualmente, levou ao desenvolvimento da biologia molecular e da genética moderna. [2]

O DNA, ou material genético, contém informações cruciais para a hereditariedade, determinando as características dos indivíduos. A descoberta de sua estrutura representa um marco importante no desenvolvimento da biologia ao longo dos últimos dois séculos, contribuindo significativamente para avanços no melhoramento de organismos vivos e na compreensão de processos biológicos. [3] Em muitas técnicas usadas para observar aglomerados de DNA, são realizadas etapas como maceração, peneiramento, uso de solução de lise (sal e detergente), incubação em banho-maria, resfriamento do filtrado e redução da diluição do DNA com álcool.

2) OBJETIVOS DA AULA PRÁTICA

Extrair o material genético, DNA, da banana e da cebola para análise e discussão dos processos que viabilizam esta extração.

3) MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 Materiais

• Material biológico de origem vegetal (banana e cebola);

• Faca;

• Cadinho;

• Pistilo;

• Dois béqueres;

• Funil;

• Papel filtro;

• Duas colheres de sopa de detergente líquido;

• Duas colheres de chá de NaCl (sal de cozinha);

• Álcool gelado (92%);

• Gelo;

3.2 Métodos ou Procedimentos

Inicialmente foi realizado o preparo da solução lise conforme a descrição a seguir.

Em seguida foi executado o preparo do material biológico. Utilizando uma faca, tanto a cebola quanto a banana, foram picados em pedaços pequenos e inseridos no cadinho. Com o auxílio de um pistilo o material foi macerado até uma obter uma textura mais fluída.

Figura 1 - Banana picada e macerada

Fonte: Arquivo pessoal.

Figura 2 - Cebola picada e macerada

Fonte: Arquivo pessoal.

Com o material preparado, este foi imerso no béquer contendo a solução lise e então misturado vagarosamente com o auxílio de um bastão de vidro.

Figura 3 - Cebola e banana maceradas e misturadas na solução lise

Fonte: Arquivo pessoal.

Com a mistura pronta, inseriu-se o béquer em banho maria a 70ºC por um tempo de 10 a 15 min. Após este período, o recipiente foi retirado do banho maria e então filtrou-se a solução utilizando um funil contendo papel filtro.

Figura 4 - Solução de banana sendo filtrada

Fonte: Arquivo pessoal.

Após