Reações de Precipitação de Proteínas

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Curso: Farmácia

Disciplina: Bioquímica

Professora: Jakeline Soares

Alunos(as): Emeny Esther R. de Queiroz, Lorena Rosa Lino Lima, Hamira Brandão, Ângela Moura, Ana Clara Lopes.        

                                                      Relatório

      Aula Prática 10 – Reações de Precipitação de Proteínas (PARTE II)

Introdução:

Quando adicionamos sais neutros a uma solução, ocorre um aumento da força iônica (aumento da concentração de íons) do sistema. Assim, quando adicionamos pequenas quantidades de sal a uma solução contendo proteínas, as cargas provenientes da dissociação do sal passam a interagir com as moléculas proteicas, diminuindo a interação entre elas. Consequentemente, temos um aumento da solubilidade da proteína no meio aquoso. A esse fenômeno dá-se o nome de "Salting-in". ‘

Em condições de elevada força iônica, decorrente da adição de grandes quantidades de sal, temos o efeito contrário. A água, que apresenta um grande poder de solvatação, passa a interagir com as duas espécies: as proteínas e os íons provenientes da dissociação do sal. Porém, a água apresenta maior tendência de solvatação de partículas menores (nesse caso, os íons). As moléculas de água, ocupadas em sua interação com os íons, deixam a estrutura Proteica. Como consequência, temos maior interação proteína-proteína, diminuição da solubilidade em meio aquoso e, consequentemente, precipitação da proteína. A esse fenômeno de insolubilização da proteína em decorrência de um considerável aumento da força iônica do meio dá-se o nome de "Salting-out".

Este é um processo importante para separação de proteínas uma vez que a concentração de sal necessária para precipitação é diferente para cada proteína.

“Salting out” caracteriza a precipitação de proteínas de suas soluções aquosas por adição de sal. Os sais de íons bivalentes como MgCl2 e (NH4)2SO4 têm efeito na solubilidade das proteínas globulares devido alterarem a força iônica das moléculas. Concentrações elevadas de sais podem remover a água de hidratação das moléculas de proteínas (camada de solvatação), expondo as cargas elétricas e possibilitando uma maior interação eletrostática entre as moléculas. Desta forma, pode ocorrer agregação das moléculas e consequente precipitação. A adição de ácidos fortes, bases fortes e sais de metais pesados também influem sobre as proteínas presentes em soluções podendo então precipitá-las.

Objetivo:

• Observar a perda de solubilidade das proteínas (precipitação), por meio do emprego de ácidos e bases fortes, sais e sais de metais pesados.

Procedimento experimental:

• Numeramos 05 tubos de ensaio e prosseguimos conforme indicado abaixo:

1. Tubo de Ensaio 01 – Foi pipetado 2 ml de Leite, e vagarosamente, pela parede do tubo de ensaio, 3 ml de Acetato de Chumbo [5%] – Sem homogeneizar o tubo de ensaio.
2. Tubo de Ensaio 02 - Foi pipetado 2 ml de Leite, e vagarosamente, pela parede do tubo de ensaio, 3 ml de Ácido Acético P.A – Sem homogeneizar o tubo de ensaio.
3. Tubo de Ensaio 03 - Foi pipetado 2 ml de Leite, e vagarosamente, pela parede do tubo de ensaio, 3 ml de NaOH [50%] – Sem homogeneizar o tubo de ensaio.
4. Tubo de Ensaio 04 - Foi pipetado 2 ml de Leite, e vagarosamente, pela parede do tubo de ensaio, 3 ml de HCL P.A – Sem homogeneizar o tubo de ensaio.
5. Tubo de Ensaio 05 - Foi pipetado 2 ml de Leite, e vagarosamente, pela parede do tubo de ensaio, 3 ml de Sulfato de Amônio [50%]  – Sem homogeneizar o tubo de ensaio.

OBSERVAÇÃO: Em todos os tubos de ensaio, foi observado o aparecimento de sedimento branco que indica precipitação proteica.

Chegando aos Seguintes Resultados:

Tubo de Ensaio	Solução	Método            De Precipitação	Resultado (Positivo/Negativo)	Precipitação (Muito/Pouco evidente)
Tubo de Ensaio 01	Leite	Acetato de Chumbo [5%]	Positivo	Muito
Tubo de Ensaio 02	Leite	Ácido Acético P.A	Positivo	Pouco, ainda Homogênio
Tubo de Ensaio 03	Leite	NaOH [50%]	Positivo	Muito, sendo Bifásico
Tubo de Ensaio 04	Leite	HCL P.A	Positivo	Médio/ Muito
Tubo de Ensaio 05	Leite	Sulfato de Amônio [50%]	Positivo	Muito