A DIVISÃO CELULAR

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Universidade Federal Rural do Semiárido - UFERSA Pró-Reitoria de Graduação - PROGRAD Centro de Ciências Biológicas e da Saúde - CCBS Curso de Bacharelado em Biotecnologia

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA

DIVISÃO CELULAR

Francisca das Chagas da Silva Paula Neta

Lídia Mayara da Costa cruz

Santiago Oliveira Menezes

Professor Dr. Carlos Eduardo Alves Soares

Mossoró/RN

2017

INTRODUÇÃO

Em atividade experimental foi possível observar células do ápice radicular da cebola e identificar a fase do ciclo celular em que estas se encontravam.

O ciclo celular é um processo pelo qual uma célula passa desde seu nascimento até sua divisão. Todo esse processo integra duas fases fundamentais, interfase e fase mitótica. (Notapositiva.com).

A interfase é tida como a fase mais longa do ciclo celular, é nesta fase que as células se encontram a maior parte do tempo. Três subfases integram-se nessa fase, são elas: G1, S e G2. A interfase é responsável pelo crescimento celular e duplicação do DNA. (Notapositiva.com).

A fase mitótica é a fase do ciclo celular onde há ocorrência de duas divisões, divisão do núcleo – mitose – e do citoplasma – citocinese. Na mitose integram-se quatro subfases: prófase, metáfase, anáfase e telófase, estas fases são marcadas por um conjunto de acontecimentos. (Notapositiva.com).

A prófase é a etapa mais longa da mitose, é nela que os filamentos da cromatina se condensam. (Notapositiva.com).

A metáfase é a etapa onde o fuso acromático se liga aos centrômeros dos cromossomos, que já atingiram encurtamento máximo, formando assim a placa equatorial. (Notapositiva.com).

Na anáfase ocorre a fragmentação dos centrômeros, separando assim as cromátides, passando cada uma destas a formar agora um cromossoma. (Notapositiva.com).

Na telófase ocorre o contrário do que se passa na prófase. A cromatina vai descondensar e alongar (Notapositiva.com). As células se dividem para aumentar seu número e com isso produzindo células-filas idênticas, esse é um processo que ocorre em células diploides de organismos haploides. (GRIFFITHS, 2013)

OBJETIVOS

A aula prática teve como objetivo preparar uma lâmina para observação e reconhecimento das fases da mitose na região meristemática das raízes de cebola (Allium cepa).

METODOLOGIA

MATERIAIS

• Bulbo de cebola

• Copo com água

• Estilete de lâmina

• Pinça de metal

• Lâminas e lamínulas

• Becker

• Corante Giemsa 0,6%

• Água destilada

• Placa de Petri

• Pontas de agulha

• Hcl 5N

• Solução de colchicina 0,2%

• Papel toalha

• Microscópio óptico

• Solução Carnoy 3:1 (etanol: ácido acético)

• Solução de ácido acético 45%

• Freezer

1. Retirar os catafilos secos de raízes velhas do bulbo de cebola. Fazer pequenos furos, com um estilete na região do prato, onde germinam as raízes;

1. Colocar a cebola em um copo contendo água, de modo que apenas a base da cebola entre em contato com a água, perfurando a cebola com palitos de dente para apisoá-la na boca do copo. Providenciar copos escuros ou recobertos com papel alumínio;

1. Aguardar cerca de 3 dias para que ocorra a emissão de raízes. Trocar a água do copo diariamente;

1. Pré-tratamento: colete pontas de raízes em crescimento ativo e mergulhe-as em um recipiente aberto contendo uma pequena quantidade de colchicina 0,2% por 20-24 horas na geladeira a cerca de 10 °C;

1. Fixação: mergulhe as raízes em Carnoy 3:1 por 2 a 20 horas à temperatura ambiente;

1. Estocagem: caso não queira trabalhar com o material imediatamente, estoque as raízes no próprio fixador no freezer ou em etanol na geladeira;

1. Lavagem: lave as raízes, mergulhando-as em água destilada (5 minutos cada);

1. Hidrólise: enxugue as raízes rapidamente em papel filtro e mergulhe-as em Hcl 5N à temperatura ambiente por 20 minutos;

1. Transfira uma ponta da raiz para a lâmina. Enxugue cuidadosamente a raiz com papel filtro e acrescente uma gota de ácido acético a 45%. Retire a coifa e as capas mais externas da raiz procurando deixar apenas o meristema. Corte ou fragmente o meristema em pedaços tão pequenos quanto possível. Cubra com uma lamínula e bata cuidadosamente em cima dos fragmentos do meristema até que cada um deles se transforme numa pequena mancha de células espalhadas. Verifique no microscópio óptico, com o diafragma do condensador parcialmente fechado ou com o condensador do microscópio deslocado para baixo, se as células estão bem espalhadas. Se o espalhamento não estiver bom, bata novamente com cuidado, até obter um espalhamento satisfatório. Nesse ponto, esmague o material colocando o conjunto lâmina-lamínula em um papel filtro dobrado, pressionando firme e cuidadosamente para não permitir nenhum deslize da lamínula sobre a lâmina;

1. Retirada da lamínula: congele o conjunto lâmina-lamínula em uma superfície gelada dentro do freezer, por 20 minutos, e rapidamente abra o freezer e retire a lamínula e com o auxilio de uma gilete ou bisturi retire rapidamente a lamínula. Deixe a lâmina secar ao ar;

1. Coloração com Giemsa: coloque as lâminas em uma Placa de Petri e acrescente a solução de Giemsa a 0,6%. Controle cuidadosamente a intensidade da coloração deixando o corante agir por 10 minutos. Para retirar as lâminas da solução, acrescente lentamente água de torneira até que os cristais sobrenadantes

transbordem. Em seguida, retire o restante da solução cortante e lave rapidamente as lâminas com água destilada;

1. Montagem da lâmina: seque as lâminas ao ar, cubra com uma lamínula limpa e sele com esmalte incolor.

1. Observar no microscópio as fases da mitose com as objetivas 4x, 10 e 40x.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

O material biológico utilizado foi coletado de raízes de cebola (Anexos 1, 2 e 3), e após coloração com Giemsa a 0,6% e remoção do corante (Anexo 4 e 5), a lâmina contendo o material foi levada ao microscópio para observação nas objetivas de 4x, 10x e 40x (anexos 7, 8 e 9). Foi observada a variada coloração do material, permitindo assim reconhecimento das partes das células. Apesar de ter havido aglomerado do material na lâmina devido esmagamento insuficiente, o que dificultou a compreensão das fases da divisão celular, foi possível identificar que as células se encontravam na interfase devido à presença de núcleos.

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