POP IDENTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS PATOGÊNICOS

INTRODUÇÃO

Microrganismos patogênicos estão por todos os lugares, e para serem identificados temos que fazer testes e culturas para identifica-los. Temos testes presuntivos e confirmativos. Cada microrganismo age de uma forma, por isso cada um tem testes específicos os chamados confirmativos.

MATERIAIS

-18 Tubos;

-9 Erlenmeyer;

- 2 Laminas;

- Caldos macConkey, BHI, TSB;

- S.S.P.T;

-Ágar Cetrimida, MacConkey, Sal Manitol, PCA, SS ou XLD;

-Soro polivalente anti-salmonella;

- Fita de oxidase;

-Reagentes para INVIC, água oxigenada;

- Plasma de coelho;

-Alça de platina;

-10 Placas de petri;

-Bico de Bunsen;

-Álcool;

-Estufa;

-Pera;

-Micropipeta.

PRECAUÇÕES

1- Estar devidamente equipado com EPIs, como jaleco de manga comprida, luvas, mascara n95, touca, sapatos fechados e roupa branca.

2- Esterilizar a bancada com álcool antes de começar e após terminar os procedimentos.

3- Fazer todo procedimento entre o 2 bicos de Bunsen.

PROCEDIMENTO

E. coli.

1-Jogar álcool na bancada e com o papel espalhar por toda área a ser utilizada.

2- Ligar os Bicos de Bunsen.

3- Diluir a amostra em S.S.P.T.

4- Pegar 10 mL da diluição e passar para o erlenmeyer contendo 90 mL de TSB e incubar a 32,5 ± 2,5°C por 18 a 24h;

5- Pegar do TSB 10 mL após as 24h, e passar para o erlenmeyer contendo 100 mL de caldo macConkey e incubar a 43±1 °C por 24 a 48h;

6- Com o auxilio de um alça de platina, previamente flambada passar uma alçada do caldo macConkey para o ágar macConkey, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24h;

7-Do ágar macConkey com o auxilio de uma alça de platina, passar um pouco do microrganismo para o TSA, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24;

8- Do TSA fazer oxidase;

9- Do meio do TSA depois que crescer os microrganismos passar para os tubos para fazer as

provas do INVIC;

10- Incubar para o crescimento;

11-Despois que houver o crescimento (turvar), adicionar os reagentes nos tubos;

12- No Vm acrescentar 5 gotas de Vermelho de Metila;

13- No Vp adicionar 12 gotas de α- naftol e 4 gotas de KOH 40%;

14- Na água peptonada acrescentar 4 a 6 gotas do Reativo de Kovac’s;

15- Observar os resultados;

16- Se for Indol e Vm positivo e Vp e citrato negativo, indicativo de Escherichia coli.

17- Desligar os bicos de Bunsen;

18- Limpar a bancada.

P.aeruginosas

1-Jogar álcool na bancada e com o papel espalhar por toda área a ser utilizada.

2- Ligar os Bicos de Bunsen.

3- Diluir a amostra em S.S.P.T.

4- Pegar 10 mL da diluição e passar para o erlenmeyer contendo 90 mL de TSB e incubar a 32,5 ± 2,5°C por 18 a 24h;

5- Pegar do TSB com o auxilio de um alça de platina, previamente flambada passar uma alçada do TSB e passar para o ágar Cetrimida, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24h;

7-Do ágar Cetrimida com o auxilio de uma alça de platina, passar um pouco do microrganismo para o TSA, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24;

8- Do TSA fazer oxidase;

9- Do meio do TSA fazer coloração de gram;

10- Com o auxilio da alça de platina passar uma alçada para o caldo BHI e incubar a 41°C por 48h;

11- Desligar os bicos de Bunsen;

12- Limpar a bancada.

Salmonella

1-Jogar álcool na bancada e com o papel espalhar por toda área a ser utilizada.

2- Ligar os Bicos de Bunsen.

3- Diluir a amostra em S.S.P.T.

4- Pegar 0,1 mL da diluição e passar para o tubo contendo caldo rapapport e incubar a 32,5 ± 2,5°C por 18 a 24h;

5- Com o auxilio de um alça de platina, previamente flambada passar uma alçada do caldo rapapport para o ágar XLD ou SS, incubar a 35°C por 18 a 24h;

7-Do ágar XLD ou SS com o auxilio de uma alça de platina, passar um pouco do microrganismo para o TSA, incubar a 35°C por 24;

8- Colocar solução salina 0,9%, fazendo uma suspenção de microrganismo;

9- Pegar 0,3 mL da suspensão de M.O e passar para a placa e por o soro polivalente anti- salmonela;

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