CURSO DE FARMÁCIA DISCIPLINA DE IMUNOLOGIA CLÍNICA

CENTRO UNIVERSITÁRIO FRANCISCANO

ÁREA DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

CURSO DE FARMÁCIA

DISCIPLINA DE IMUNOLOGIA CLÍNICA

DILUIÇÕES

[pic 1]

        Os métodos de laboratório nos quais uma quantidade de uma substância é adicionada a outra para reduzir a concentração de uma das substâncias são conhecidos como diluições.

IMPORTANTE: Uma diluição é uma expressão de concentração, não de volume. Expressa de outra forma, uma diluição indica a quantidade relativa de substâncias em uma solução. Quando a palavra diluição é usada, ela deve significar o número de partes que foram diluídas em um número total de partes. Em outras palavras, uma diluição deve significar o volume de concentrado no volume total da solução final. O menor número corresponde ao número de partes da substância que está sendo diluída; o maior número refere-se ao número total de partes da solução final.

        Considere as seguintes frases:

• Faça uma diluição 1 para 10 de soro em salina.
• Faça uma diluição 1 em 10 de soro em salina.
• Faça uma diluição 1 para 10 de soro com salina.
• Faça uma diluição 1/10 de soro com salina.
• Faça uma diluição 1:10 de soro usando salina.
• Faça uma diluição de 1 parte de soro e 9 partes de salina.
• Faça uma diluição de 1 parte de soro para 9 partes de salina.

Qual é a diferença entre essas frases?  Nenhuma! Todas significam exatamente a mesma coisa.

ENTÃO: Diluir é acrescentar solvente a uma solução mantendo-se inalteradas as quantidades de soluto existentes.

D=      V soluto[pic 2]

   V soluto + V solvente

1 parte de soro

+ 9 partes de salina[pic 3]

10 partes de solução final

        O significado difere quando usamos a palavra razão. Os números passam a se referir aos materiais da razão, que podem ser escritos de diversas formas:

• 1:9
• 1 para 9
• 1/9

Não importa como a razão é escrita, a ordem dos números deve corresponder à ordem das substâncias às quais a razão se refere.

Ex: Uma razão de soro para salina 1:9 é igual a uma razão salina para soro 9:1, o que é a mesma coisa que uma diluição de 1:10 de soro com salina.

TÍTULO é a concentração de uma solução determinada por titulação. É a menor quantidade ou concentração que produzia um efeito particular ou produto. O título é a recíproca da diluição. Então, em uma reação de pesquisa de anticorpos positiva na diluição ½ e ¼ e negativa na diluição 1/8 e 1/16, o título é 4.

Ex:

 Dilua 2 mL de soro com 28 mL de salina. Deve-se somar 28 mL de salina em 2 mL de soro. Então, o volume total da solução final é 30 mL.

2 mL de soro

+ 28 mL de salina[pic 4]

30 mL de solução final

A diluição desta solução seria 2 em 30. No entanto, diluições são geralmente propostas como 1 para algum número. Para converter uma diluição 2:30 em uma diluição de 1 em algo, é só montar um problema de razão-proporção: 2 está para 30 assim como 1 está para X.

2/30 = 1/X          2X=30     X=15  - a diluição soro em salina é 2:30 ou 1:15

A razão desta solução seria 2: 28. No entanto, diluições são geralmente propostas como 1 para algum número. Para converter uma diluição 2:28 em uma diluição de 1 em algo, é só montar um problema de razão-proporção: 2 está para 28 assim como 1 está para X.

2/28 = 1/X          2X=28     X=14  - a razão soro em salina é 2:28 ou 1:14  ou então, uma razão salina em soro 14:1

Para diluições seriadas, ao se calcular a concentração, é necessário multiplicar a concentração original pela 1ª diluição, a seguir pela segunda diluição, esta pela terceira diluição e assim por diante, até que a diluição final seja conhecida.

Ex: Uma solução de NaOH 2 M é diluída 1/5 e 1/10. Determine a concentração de cada uma das 3 soluções.

• solução 1 de NaOH: 2M
• solução 1/5 de NaOH: 2M x 1/5 = 0,4M
• solução 1/10 de NaOH: 2M x 1/5 x 1/10 = 0,04M

ENTÃO: Para que diluir em reações imunológicas?

• Para diminuir a concentração de anticorpos inespecíficos.
• Para determinar uma concentração de anticorpos em testes semi-quantitativos – título.

EXERCÍCIOS:

1. Faça 250 mL de uma diluição 1:10 de soro em salina.
2. Faça 45 mL de uma diluição 1:15 de soro em salina.
3. Faça 33 mL de uma diluição 1:22 de soro em salina.
4. Faça 4 mL de uma diluição 1:8 de soro em salina.
5. Faça 7,5 mL de uma diluição 1:150 de soro em salina
6. Determine a quantidade de soro em 40 mL de uma diluição 1:5 de soro em salina.
7. Quanto de uma diluição de 1:32 de urina com água destilada poderia ser feita com 2 mL de urina?
8. Uma diluição 1/10 de uma substância é diluída 3/5, rediluída 2/15 e diluída mais uma vez ½. Qual é a concentração final?
9. Uma solução 3% é diluída 2/30. Qual é a concentração resultante?
10. Uma solução que contém 70 mg/dL é diluída 1/10 e de novo 2/20. Qual é a concentração final?
11. A alíquota de 0,2 mL de soro do paciente é adicionada a 0,8 mL de salina. Transfere-se 0,5 mL para um tubo 2 que possui 0,5 mL de salina. Este procedimento é feito até o tubo 10. As diluições foram utilizadas para testar um anticorpo de um agente infeccioso. Do tubo 1 ao 8, a reação foi positiva para o anticorpo testado. Qual o título que deve ser apresentado ao anticorpo?
12. Em uma série de 8 tubos, coloque 0,9 mL de solução fisiológica no 1º tubo e 0,5 mL de solução fisiológica nos tubos restantes. Adicione 0,1 mL de soro ao 1º tubo, misture e coloque 0,5 mL dessa solução no tubo subseqüente e repita o processo até o último tubo. Despreze o último 0,5 mL. Para cafa tubo adicione 0,5 mL de antígeno. A partir disso, responda:

1. Qual é a diluição de cada tubo antes de adicionar o antígeno?
2. Qual a quantidade de soro presente nos dois primeiros tubos após a transferência?
3. Qual pe a diluição em cada tubo após a adição do antígeno?

1. Quais diluições representam as misturas abaixo?

1. 0,3 mL de soro sanguíneo com 4,2 mL de solução fisiológica.
2. 0,5 mL de soro sanguíneo com 3 mL de solução fisiológica.
3. 0,2 mL de soro sanguíneo com 6,2 mL de solução fisiológica.

1. Em vários tubos numerados de 1 a 5, pipetou-se 3X mL de água em cada um deles. No tubo nº 1 pipetou-se X mL de azul de metileno e homogeneizou-se esta solução. Pipetou-se do tubo nº 1 X mL e passou-se para o tubo nº 2. Este procedimento foi feito até o 5º tubo.

1. Qual o volume de todos os tubos se X=2 e as respectivas diluições?
2. Se X=10, qual é o volume final de todos os tubos e as respectivas diluições?

1. Esquematize a diluição de 5 mL de azul de metileno diluído a 1/4000.
2. Esquematize a preparação de 50 mL de uma solução tampão fosfato a 1/2000. O tampão foi fornecido pelo fabricante a uma diluição 1/10.
3. Pipetou-se 500 μL se um soluto em tubo de ensaio e acrescentou-se 4,5 mL de solvente. Qual é a diluição?
4. Pipetou-se 200 μL se um soluto em tubo de ensaio e acrescentou-se 9,8 mL de solvente. Qual é a diluição?
5. Num laboratório de Virologia, foi diluído 200 μL de soro diluído a 1:4. Porém, a diluição correta seria 1:10. Como fazer essa correção?
6. Em uma reação imunoenzimática, foi colocado 0,1 mL de soro, 0,8 mL de diluente e 0,1 mL de conjugado. Que volume de soro existe no volume final e qual é a diluição deste soro?
7. Uma solução estoque de ácido oxálico 1/100 está disponível no laboratório de química. Como o laboratorista prepararia 6 mL de ácido oxálico 1/150?
8. Fazer uma diluição seriada de razão 2 a partir de uma solução de azul de metileno em água. Usar uma bateria de 5 tubos. O volume em cada tubo deve ser 4 mL.
9. Fazer uma diluição seriada de razão 10 a partir de uma solução de azul de metileno em água. Usar uma bateria de 8 tubos. O volume em cada tubo deve ser 4,5 mL.
10. Fazer uma diluição seriada de razão 5 a partir de uma solução de azul de metileno em água. Usar uma bateria de 5 tubos. O volume em cada tubo deve ser 3 mL.
11. Fazer uma diluição seriada de razão 2 a partir de uma solução de azul de metileno diluído ½ em água até a diluição 1/64. O volume em cada tubo deve ser 0,7 mL.
12. Fazer uma diluição seriada de razão 2 a partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/16 em água até a diluição 1/512. O volume em cada tubo deve ser 1,6 mL.
13. Fazer uma diluição seriada de razão 3 a partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/3 em água até a diluição 1/81. O volume em cada tubo deve ser 0,2 mL.
14. Fazer uma diluição seriada de razão 3 a partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/62 em água até a diluição 1/162. O volume em cada tubo deve ser 0,4 mL.
15. Fazer uma diluição seriada de razão 5 a partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/10 em água até a diluição 1/250. O volume em cada tubo deve ser 1,6 mL.
16. Fazer uma diluição seriada de razão 10 a partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/20 em água até a diluição 1/20000. O volume em cada tubo deve ser 3,6 mL.
17. Em vários tubos numerados de 1 a 6, pipetou-se 0,5 mL de tampão em todos eles. No 1º tubo pipetou-se 500 μL de azul de metileno e homogeneizou-se. Transferiu-se do tubo nº 1 para o tubo nº 2, 500 μL. Este procedimento foi realizado até o 6º tubo. Sabendo-se que não houve perda de volume, responda.

1. Qual o volume de todos os tubos e as respectivas diluições?
2. Qual é o volume e as respectivas diluições de todos os tubos se fosse pipetado 3,5 mL de tampão.

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