O Diagnóstico Molecular e Bioinformática

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Disciplina:

Tecnologia Genética: Diagnóstico Molecular e Bioinformática

Controle de Qualidade em laboratórios de Biologia Molecular (pré-analítico, analítico e pós-analítico)

MANAUS

2018

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Discentes:

Camille da Silva Uleon - 17106400

Márcia Reis de Souza - 17210640

Thaíssy dos Santos Xavier - 17211859

Controle de Qualidade em laboratórios de Biologia Molecular (pré-analítico, analítico e pós-analítico)

Projeto apresentado ao Professor Francisco Neto, para obtenção da nota parcial da primeira avaliação na disciplina Tecnologia Genética: Diagnóstico Molecular e Bioinformática

MANAUS – AM

SUMÁRIO        

1. Introdução4
2.  METODOLOGIA4

2.1. DIAGNÓSTICO4

2.2. DESCRIÇÃO5

2.3. SETORES .............................................................................................................5

           2.3.1. SETOR 01 .......................................................................................................... 5

2.3.2. SETOR 02 ......................................................................................................... 6

2.3.3. SETOR 03 ......................................................................................................... 6

2.3.4. SETOR 04 ......................................................................................................... 7

2.3.5. SETOR 05 ......................................................................................................... 7

2.3.6. SETOR 06 ......................................................................................................... 8

2.3.7. SETOR 07 ......................................................................................................... 8

2.3.8. SETOR 08.......................................................................................................... 8

 3. FASE PRÉ ANALÍTICA9

Digite o título do capítulo (nível 3)6

1. INTRODUÇÃO

O Laboratório de Biologia Molecular Da UniNorte (BioNorte), é definido como um espaço multiusuário. Sua finalidade é possibilitar o desenvolvimento de procedimentos de Biologia Molecular dos projetos de professores e alunos do Centro Universitário do Norte. Situado no prédio do Museu de Biotecnologia Francisco Neto da Universidade de Biomedicina (UBIOM), o BioNorte tem sua organização administrativa e seu funcionamento disciplinados pelo presente conjunto de Normas Gerais, pelos Regimentos, Regulamentos e Normas da Instituição, além do que está estabelecido nas legislações estadual e federal.

O Laboratório de Biologia Molecular Da UniNorte, tem como áreas de atuação a Biologia Avançada, os Recursos Genéticos e o Melhoramento de Plantas, nas linhas de pesquisa de diversidade genética de bancos de germoplasma, caracterização molecular de clones selecionados, análise quantitativa de transcritos gênicos por PCR-RT (reação em cadeia da polimerase em tempo real) e genômica funcional aplicada a fitopatógenos. O laboratório abrange uma área total de 188,60 m e foi dividido em oito salas, distribuídas conforme as atividades desenvolvidas, para melhor adequar o fluxo de trabalho. (Anexo 1).

2. METODOLOGIA

2.1. Diagnóstico

Realizou-se o levantamento das condições atuais do laboratório para atender aos requisitos da implantação de BPLs. Inicialmente, efetuaram-se: levantamento das instalações físicas do laboratório; descrição do ambiente de trabalho; condições ambientais; gestão ambiental; disposição dos equipamentos nas áreas de trabalho; manutenção e calibração dos equipamentos, produtos químicos manuseados no laboratório; e os equipamentos de proteção individual e coletiva.

Posteriormente, foram observados os requisitos referentes a: organização, fluxo de pessoas, acomodações, procedimentos operacionais padrão (POP), descarte de resíduos, registros de equipamentos, materiais e reagentes e higiene e segurança dos manipuladores nos aspectos individual, coletivo e ambiental. Após o diagnóstico, para cada não conformidade identificada foram propostas as medidas necessárias para correção, de acordo com as normas vigentes.

2.2. Descrição do Laboratório de Biologia Molecular

O Laboratório de Biologia Molecular da Embrapa Amazônia Ocidental tem como áreas de atuação a Biologia Avançada, os Recursos Genéticos e o Melhoramento de Plantas, nas linhas de pesquisa de diversidade genética de bancos de germoplasma, caracterização molecular de clones selecionados, análise quantitativa de transcritos gênicos por PCR-RT genômica funcional aplicada a fitopatógenos (reação em cadeia da polimerase em tempo real) e nhntrin.

 2.3. SETORES DO LABORATÓRIO

        O laboratório é dividido em 8 setores. O laboratório abrange uma área total de 188,60 m e foi dividido em oito salas, distribuídas conforme as atividades desenvolvidas, para melhor adequar o fluxo de trabalho.

2.3.1. Setor 01: Preparo de soluções e materiais

• Atividades desenvolvidas: Preparo de soluções e materiais para procedimentos nas diversas análises de pesquisa, preparo de amostras e materiais para esterilização e lavagem de vidrarias.
• Descrição do ambiente de trabalho: Área de 37,50 m, construída em alvenaria, piso de concreto polido e paredes revestidas de azulejo, janelas tipo esquadrias com vidros lisos e transparentes bancadas de concreto pintadas em epóxi, ambiente climatizado ventilação e iluminação adequadas, mobiliário dentro dos padrões ergonômicos desejáveis, com algumas ressalvas.
• Equipamentos: Agitador magnético, balança analítica, balança de precisão, capela de exaustão, estufa de secagem, freezer hibridizador, refrigerador, sistema de purificação de água e vórtex.
• Materiais: Vidrarias: balão volumétrico, copos de Becker, erlenmeyer pipetas e provetas.
• Produtos químicos manuseados: Acetato de potássio, ácido acético, ácido bórico, ácido clorídrico, álcool isoamilico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, azul de bromofenol, cloreto de sódio, clorofórmio, ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA), etanol, formaldeído, hidróxido de sódio, isopropanol, fosfato de sódio, nitrato de prata, persulfato de amônio, polivinilpirrolidona (PVP), dodecil sulfato de sódio (SDS),tris base e xileno ciano.

2.3.2. Setor 02: Extração de ácidos nucleicos

• Atividades desenvolvidas: Extração de DNA de plantas, utilizando-se como amostras folhas e raízes; extração de DNA de fungos fitopatogênicos; centrifugação de materiais e amostras.
• Descrição do ambiente de trabalho: Área de 18,30m, construída em alvenaria, piso de concreto polido e paredes revestidas de azulejo, janelas tipo esquadrias com vidros lisos e transparentes, bancadas de concreto pintadas em epóxi, ambiente climatizado, ventilação e iluminação adequadas e mobiliário dentro dos padrões ergonômicos desejáveis, com algumas ressalvas
• Equipamentos: Banho-maria, câmara de fluxo laminar, capela de

Exaustão, centrífuga refrigerada, estufa bacteriológica, freezer microcentrífuga e refrigerador.

• Material: Botijão criogênico
• Produtos químicos manuseados: Acetato de amônio acetato de potássio, álcool isoamílico, β-mercaptoetanol, Cloreto de sódio clorofórmio, brometo de cetil trimetil amônio (CTAB), EDTA, etanol fenol, isopropanol e nitrogênio líquido.
• Resíduos gerados: Álcoois, clorofórmio, fenol, material orgânico, luvas e ponteiras.

2.3.3. Setor 03: Amplificação de material genético

• Atividades desenvolvidas: Preparo de reações com amostras de DNA para amplificação do material genético em termociclador, quantificação de ácidos nucleicos, diluições de amostras e preparo de componentes de reações.
• Descrição do ambiente de trabalho: Área de 38,90 m2, com alvenaria, piso em PVC e paredes revestida com massa corrida e pintadas em epóxi, janelas tipo esquadrias com vidros lisos e transparentes e alguns vidros foscos, bancadas de concreto revestido de azulejo e bancadas de concreto pintadas em epóxi, ambiente climatizado, ventilação e iluminação adequadas e mobiliário dentro dos padrões ergonômicos desejáveis, com algumas ressalvas.
• Equipamentos: Centrífuga, computador, freezer, microcentriífuga, micropipeta, nanodrop, PCR em tempo real, refrigerador, sistema de purificação de água, termociclador e vórtex de placas.
• Produtos químicos manuseados: Álcool etilico e cloreto de magnésio
• Resíduos gerados: Microplacas de polietileno, microtubos e ponteiras

2.3.4. Setor 04: Eletroforese

• Atividades desenvolvidas: Preparo de géis de agarose e poliacrilamida, eletroforese vertical em gel de poliacrilamida das amostras de DNA, eletroforese horizontal em gel de agarose das amostras de DNA, coloração de géis de poliacrilamida, captura de imagens em sistema de fotodocumentação

• Descrição do ambiente de trabalho: Área de 29 m2 construída em alvenaria, piso de concreto polido e paredes revestidas com massa corrida e pintadas em epóxi, janelas tipo esquadrias com vidros lisos e transparentes, bancadas de concreto pintadas em epóxi, ambiente climatizado, ventilação e iluminação adequadas e mobiliário dentro dos padrões ergonômicos desejáveis, com algumas ressalvas.

• Equipamentos: Agitador orbital, balança, capela de exaustão, computador, cubas de eletroforese vertical e horizontal, fontes para eletroforese, incubadora com agitação orbital, micro-ondas, refrigerador, sistema de fotodocumentação.

• Produtos químicos manuseados: Álcool etílico, álcool isoamiílico, ácido acético, ácido nítrico, acrilamida, agarose, bisacrilamida,brometo de etídio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, formaldeído, hidróxido de sódio, nitrato de prata, persulfato de amônia e temed.

• Resíduos gerados: Gel de agarose com brometo de etídio, gel de poliacrilamida, solução de etanol e ácido acético, solução de ácido acético, solução de ácido nítrico, solução de nitrato de prata solução de hidróxido de sódio, solução de carbonato de sódio e formaldeído, solução de carbonato de potássio e formaldeído, tampão TBE (Tris, ácido bórico, EDTA), tampão TBE com brometo de etídio, luvas, papéis e ponteiras plásticas contaminadas

2.3.5. Setor 05: Armazenamento de amostras