PROTEÍNAS - RESULTADOS E DISCUSSÕES

BACHARELADO EM BIOQUIMICA

Disciplina: Práticas em Bioquímica 1

TRABALHANDO COM

PROTEINAS

RESULTADOS E DISCUSSÕES

Solução padrão de Plasma: Vermelho

Solução padrão de Albumina: Incolor

Adição Ácido Forte

• Plasma:

Ao adicionar 0,5 ml do ácido tricloacético (TCA) 30% a 1 ml da solução de  plasma, observou-se que esta apresentou uma coloração branca “leite”, e que houve precipitação, pois o ácido reduz o pH do meio, fazendo as proteínas da  solução ficarem com carga liquída positiva e consequentemente reagirem com a base conjugada  do TCA formando o composto tricloroacetato de proteína, que é insolúvel em água, ocasionando assim a precipitação protéica.

•   Albumina:

O mesmo deveria ocorrer com a solução de albumina, porém, após a adição do TCA esta solução apresentou-se uma coloração branca e muito turva mas não houve precipitação. A concentração do ácido pode estar relacionada  com essa diferença, pois quanto maior a concentração, maior é a chance  da formação do tricloroacetato de proteína, diminuindo assim a solubilidade da proteína.

• Adição de água nas soluções de proteínas e ácido forte:

Não houve alterações visuais nas soluções de proteínas e ácido forte após a adição de 5 ml de água destilada em cada tubo, indicando assim que a água não reagiu com o complexo tricloroacetato de proteína.

Precipitação por força iônica

• Plasma com NaCl:  Mudou um pouco a cor, de vermelho para um vermelho mais claro. Não houve precipitação.
• Plasma com Sulfato de amônio: Não houve mudança de cor. Não houve precipitação.
• Albumina com NaCl: 

Não houve mudança de cor. Não houve precipitação.

• Albumina com Sulfato de amônio: Houve mudança de cor, de incolor para branco turvo, mas não houve precipitação.

• Com adição de 2mL de água

• Plasma com NaCl: Não houve mudança
• Plasma com Sufato de amônio: Não houve mudança

• Albumina com NaCl: Não houve mudança
• Albumina com Sulfato de amônio: Não houve mudança

Tais fenômenos estão relacionados à precipitação da proteína sem que ocorra a sua desnaturação. O “salting – in” dá-se pela solubilização do precipitado elevando-se a concentração de sais no meio e também as interações proteína-água. Enquanto o “salting – out” corresponde à precipitação da proteína através da adição de sais com alta força iônica (sais higroscópicos) como o NaCl usado no experimento, que ligam-se a água, havendo a predominância da interação proteína-proteína.

Acredita-se que nessa etapa do experimento, teria que haver precipitação dos sais com as proteínas, principalmente a precipitação com NaCl que por sinal é um sal forte e possui uma alta força iônica. Acredita-se que não houve quantidade suficiente de sal em relação a água  e soluções de proteínas, por isso não ocorreu precipitação. Com a adição de 2mL de água ao meio não ocorreu nada. Acredita-se que a quantidade insuficiente de sal adicionado já tinha reagido com o tanto de água que já tinha na solução, com isso não houve precipitação com a proteína. A interação proteína-água é maior que a interação proteína-proteina devido à baixa força de atração entre as moléculas protéicas, fazendo com que a proteína se solubilize na água.

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