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Teste de Hiv

Por:   •  19/5/2015  •  Ensaio  •  911 Palavras (4 Páginas)  •  280 Visualizações

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Princípio do teste: Determinar quali e quantitativamente os antígenos de estreptolisina O no sangue.

Passo a passo do ensaio:

A-Qualitativo:

-Deixar os reagentes, os controles e as amostras atingirem a temperatura ambiente antes de utilizá-los, homogeneizar o látex suavemente antes de usar, para que as partículas de látex suspendam completamente.

-Pipetar em diferentes partes da lâmina.

Soro

25 µl

Controle Positivo

1 gota

Controle Negativo

1 gota

Látex

1 gota em cada

-Misturar com espátulas distintas, espalhar o líquido em cada ponto da lâmina. Inclinar a lâmina para um lado e para outro, suavemente ou usar um mixer por dois minutos.  Após dois minutos ler os resultados sobre uma luz artificial.

B-LEITURA:

Reação Positiva: Aglutinação nítida: Indica presença de anti-estreptolisina O em concentração superior a 200 Ul/ml, em amostra de soro não diluído. Resultado positivo devem ser titulados por método semi-quantitativo.

Reação Negativa: Sem aglutinação: Indica concentração de anti-estreptolisina O menor que 200 Ul/ml.

C- Semi-Quantitativo:

Diluir as amostras com solução salina (0,9%):

Diluição

ASO (Ul/ml) na amostra

1+1 (1:3)

400

1+2 (1:3)

600

1+3 (1:4)

800

1+4 ( 1:5)

1000

 Proceder os testes em separado conforme técnica para determinação qualitativa. Ler a concentração da amostra biológica que corresponde à maior diluição que apresentar aglutinação. Multiplicar o resultado pelo Fator de conversão 200. Expressar o resultado em Ul/ml.

Ex.: Título encontrado = 1:5 (concentração em ASO)

5 X200 (Ul/ml)= 1000 Ul/ml.

Amostra analisada: SORO. A amostra deve ser armazenada de 2º a -8ºC por no máximo 24 horas, ou por até quatro semanas em -20ºC.

Equipamentos: Lâminas, espátulas, gotejadores para amostra. Para lavar as lâminas use apenas detergentes. Mantenha-a sempre limpa e seca.

Aplicação clínica: A estreptolisina O  é uma toxina excretada por bactérias Streptococcus A. Quando o organismo é infectado por essa bactéria, a estreptolisina será excretada e será produzido anticorpos. A medida do nível de estreptolisina O é importante para o diagnóstico de febres reumáticas e glomerulonefrite. Como todo o organismo é exposto a enzimas de estreptococcus todo sofro tem ASO. A concentração depende da idade e residência do paciente, bem como o local da infecção.

Controle de qualidade:

-Antes de ser liberada, a matéria prima e os reagentes são avaliados pelo Departamento de Controle de Qualidade do laboratório.

-Controles negativos e positivos poderão ser usados em cada série. Os resultados poderão ser comparados com amostras desconhecidas para distinguir uma pequena granulosidade de aglutinação.

-O controle Negativo deve mostrar uma leve suspensão com aglutinação não visível após 2 minutos.

-O controle Positivo deverá mostrar aglutinação dentro de 2 minutos.

Linearidades:

-O teste foi padronizado para detectar concentrações de ASO em amostras não diluídas de soro de aproximadamente 200/100 Ul/ml de acordo com a “preparação internacional de referência” da OMS.

-A especificidade e sensibilidade da Estreptolisina O látex foram avaliadas por método de comparação contra teste em lâmina independente e contra um método turbidimétrico qualitativo. 32 soros in natura; 16 de voluntários sadios e 16 com fator reumatoide foram usados no estudo. Os resultados entre ambos tiveram boa concordância.  E o teste com todas as amostras tiveram resultados iguais para os dois tipos de teste. Equivalentemente a sensibilidade diagnóstica foi encontrada para 100%.

Resultado: Este é um teste de aglutinação desenvolvido como teste qualitativo semi-quantitativo para determinação rápida de anticorpos em amostras in natura de soro não diluídas. O teste é baseado na técnica de aglutinação em látex de poliestireno, o qual foi recoberto com Estreptolisina O estabilizada. Se uma mostra tiver ASO ela aglutinara. Controles negativos e positivos são incorporados ao kit para verificar o desempenho do reagente e comparação de resultados com amostras desconhecidas. Para determinações semi-quantitativas as amostra de soro vão sendo diluídas de maneira progressiva com tampão salino. A última diluição positiva é usada para calcular a concentração de ASO na amostra. Um padrão de uso foi empregado o qual foi calibrado contra material padrão.

Apresentação do Kit:

Cat.: 062

Reagente_______ Nº1- l

Observações:

-Resíduos de detergentes no material podem causar alterações nos resultados e contaminar os reagentes. Certifique-se que o material esteja limpo e seco.

-Os reagentes e os controles são estáveis até a data de validade impressa no rótulo quando armazenados ente 2 e 8ºC.

-Não congelar.

-Não utilize após a data de validade.

-O fabricante garante a estabilidade do produto, se este for armazenado como descrito e em embalagem original.

- Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manutenção do reagente. Todo reagente contém azida sódica como conservante.

-Não ingerir ou aspirar e evitar contato com pele e mucosa.

-Os controles estão prontos para uso. Não diluir.

-Tempo de reação maior que dois minutos pode produzir resultados falsos devido a secagem do reagente.

-O reagente não pode ser congelado pois pode haver liberação de estreptolisina.

-Durante a dispensação segurar a pipeta vesrticalmente.

Identificação e Armazenamento:

Reagente 1: Látex

Suspensão de partículas de poliestireno recobertas com antígenos de estreptolisina O estabilizada 1%: Azida Sódica 0,095%

Reagente 2: Controle Positivo

Soro contendo antiestreptolisina O, suficiente para produzir aglutinação. Azida sódica 0,095%. Potencialmente Infectante

Reagente 3: Controle Negativo

Soro não reativo com o reagente látex. Azida sódica 0,095%

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