O RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO: PESQUISA DE COLIFORMES, COLIFORMES FECAIS, ESCHERICHIA COLI EM ALIMENTOS E TESTE DE GRAM
Por: Júlia Reis • 6/9/2022 • Trabalho acadêmico • 1.810 Palavras (8 Páginas) • 132 Visualizações
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RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO: PESQUISA DE COLIFORMES, COLIFORMES FECAIS, ESCHERICHIA COLI EM ALIMENTOS E TESTE DE GRAM
Ana Caroline, Ana Cristina, Ana Paula, Gabryel Brum, Júlia Reis, Patrícia Coelho, Raquel, Magda.
Centro Universitário Presidente Tancredo de Almeida Neves (UNIPTAN) – Av. Dr. José Caetano de Carvalho, 2199 – Jardim Central, São João del – Rei, Brasil.
RESUMO
O experimento objetivou verificar tipos de bactérias em amostras de leite, analisando se há presença de Escherichia coli. Foi utilizada uma amostra de leite que foi diluída em cinco soluções. Como resultado, verificou-se onde ocorreu turvação da solução e fermentação, ou alteração de cor do meio houve crescimento bacteriano. Na diluição em caldo E. coli, não foi possível a conferência do resultado. Houve também plaqueamento para teste de Gram, preparou-se um esfregaço da colônia de bactérias cultivada. Na realização do teste de Gram os resultados foram inconclusivos em razão de coloração excessiva das placas.
Palavras-chave: Coliformes. Escherichia coli. Teste de Gram.
Introdução
A presença de bactérias é algo muito recorrente na maioria dos alimentos, quando se trata da bactéria Escherichia coli, alimentos de origem vegetal ou animal que usam água em seu processamento, podem estar ainda mais relacionados a essa bactéria, desde que haja contato com a matéria fecal.
A prática experimental, tem o intuito de realizar um experimento para identificação da bactéria Escherichia coli em uma amostra de leite. Utilizou-se 5 amostras, sendo respectivamente, solução salina (diluição de cloreto de sódio 0,9% com objetivo de imitar o sangue- meio neutro), água peptonada (meio de cultura utilizado para diluição da amostra), Lauril Sulfato Triptose (caldo que utiliza a lactose para o crescimento de microrganismos através de coliformes totais, representado pelo meio turvado), caldo verde brilhante (caldo de enriquecimento para detecção de coliformes termotolerantes), por fim o caldo Escherichia coli (meio de cultivo para detectar através de coliformes termotolerantes a presença de E. coli) meio de cultura para demonstração seletiva de coliformes termotolerantes, sendo a E. coli principal representante.
Ainda neste experimento, foi utilizado o teste de Gram, que consiste em uma técnica de coloração através da preparação de um esfregaço em uma lâmina de vidro para microscopia, com objetivo de analisar a morfologia das bactérias através da coloração do experimento, podendo ser Gram-positivas (coloração violeta) ou Gram-negativa (coloração avermelhada).
objetivos
Constatar os níveis de bactérias em um mesmo tipo de alimento submetido a diferentes estados de preparação e conservação.
Detectar presença ou ausência de bactérias coliformes, determinar o número de bactérias coliformes, se existentes; verificar a presença e quantidade de Escherichia coli, apontar a condição de sanidade do produto com o resultado da verificação por bactérias.
Analisar o tipo de bactéria presente se Gram positiva ou Gram negativa e sua morfológia. Aprende a preparar o esfregaço de bactéria, realizar a técnica de coloração de Gram, aprender o fundamento do método de coloração de Gram, comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e observar a morfologia bacteriana e o comportamento do material celular diante dos corantes de Gram.
materiais
- Alça Platinada;
- Autoclave;
- Bico de Bunsen;
- Bureta;
- Esfregaço;
- Estufa;
- Lâminas;
- Lamínulas;
- Micrôscopio;
- Pêra de sucção;
- Pinça de madeira;
- Pipetas volumétricas;
- Placas de Petri;
- Tampões de gase;
- Tubo de Duran;
- Tubos de ensaio;
3.1 REAGENTES/SUBSTÂNCIAS UTILIZADAS
- Água destilada;
- Água Peptonada;
- Álcool 70%;
- Caldo Escherichia coli;
- Caldo verde brilhante (2%);
- Corante Cristal violeta;
- Fucsina.
- Lauril Sulfato Triptose (LST);
- Leite;
- Lugol;
- Solução Salina (0,9%);
Procedimentos
Para o experimento utilizou-se uma amostra de leite, onde com uma pipeta e uma perâ de sucção foi retirado 1mL da amostra a qual foi diluida em 9mL de solução salina (0,9% - meio neutro) em um tubo de ensaio e agitou-se a diluição obtida. Logo após, foram utilizados 3 tubos de ensaio, cada um contendo 9mL de água peptonada, onde transferiu-se 1mL da solução salina com leite para um primeiro tubo contendo água peptonada, o qual foi identificado como 10-1 (correspondente a sua diluição), este foi agitado. Do tubo 10-1 foi retirado 1mL da solução e tranferido para o segundo tubo também com água peptonada o qual foi identificado como 10-2 (correspondente a sua diluição), a diluição foi agitada. Finalmente foi retirado do tubo 10-2 1mL da solução que foi transferida para o terceiro tubo contendo água peptonada, identificado como 10-3 (correspondente a sua diluição).
O terceiro passo foi transferir 1mL da solução de cada um desses tubos para seus respectivos tubos identificados também como (10-1, 10-2 e 10-3), mas agora contendo 9mL de Lauril Sulfato Triptose (LST - meio de enriquecimento seletivo usado para a detecção e contagem de Escherichia coli e Coliformes totais) e um tubo de Duran. Após procedimento, os tubos foram colocados em uma estufa na temperatura entre 35,5 a 37ºC, durante 48 horas, para ocorrer o crescimento de bactérias, é possivel notar a presença através da turvação do Lauril e pela presença de gases dentro do tubo de Duran.
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