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Ação de Diferentes pH’s sobre a atividade da peroxidase

Por:   •  7/11/2017  •  Relatório de pesquisa  •  777 Palavras (4 Páginas)  •  386 Visualizações

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RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA:

Ação de diferentes pH’s sobre a atividade da peroxidase.

Goiânia – GO

2015

RESUMO

As enzimas sofrem consequências estruturais quando submetidas à variação de pH, especialmente quando a mudança é extrema devido a repulsão de cargas e quando a variação é pequena devido a dissociação. Algumas mudanças no pH não comprometem a estrutura da enzima mas reduz sua atividade por afetar o sítio catalítico. Neste relatório foi verificada a variação da atividade enzimática (peroxidase) para cada pH. As enzimas atingem atividade máxima quando em pH ótimo o qual normalmente é igual ao do ambiente em que a enzima é encontrada. A maior atividade enzimática foi em pH 3 e a menor entre 4 e 6. Foi considerado um possível erro na leitura da absorbância pelo equipamento o que justifica os dados negativos encontrados.

Palavras-chave: enzima, peroxidase, pH.

  1. OBJETIVOS

Verificar a ação do pH sobre a atividade da enzima (peroxidase).

  1. MATERIAIS E MÉTODOS

  1. Materiais
  • Solução tampão Citrato-Fosfato 0,1M(pH – 5,0 – 3,0 – 4,0 - 6,0)
  • Extrato enzimático;
  • H2O2 3% (água oxigenada);
  • Água (H2O);
  • Guarnicol;
  • Metabisulfito de sódio;
  • Banho Maria (50 ºC);
  • Espectrofotômetro;
  • 5 Tubos de ensaio;
  • Ernlenmayer;
  • Pera;
  • Pipeta volumétrica;  
  1. Procedimento

Para o preparo das amostras utilizou 5 tubos de ensaio adicionando as seguintes soluções, seguindo a ordem da tabela.  

Tabela 1 –Procedimento para preparo das amostras.

Tubo

Tampão Citrato-Fosfato 0,1M

Ext. Enzima

H2O

H2O2 (3%)

Guarnicol

HOMOGENEIZAR

Branco

2 mL pH 5,0

0

1 mL

0,5 mL

0,5 mL

1

2 mL pH 3,0

1 mL

0

0,5 mL

0,5 mL

2

2 mL pH 4,0

1 mL

0

0,5 mL

0,5 mL

3

2 mL pH 5,0

1 mL

0

0,5 mL

0,5 mL

4

2 mL pH 6,0

1 mL

0

0,5 mL

0,5 mL

Após as amostra serem homogeneizadas foram levadas ao banho maria a 50 ºC por cinco minutos. Em seguida foi adicionado 1 mL de metabisulfito de sódio em cada tubo e levados para realizar a leitura no espectrofotômetro a 470 nm.

  1. RESULTADOS E DISCUSSÃO

A Tabela 1 apresenta os valores tomados do espectrofotômetro para absorbância.

Tabela 1 – Valores da absorbância para cada amostra.

Amostra

Absorbância

Branco

1

1

0,052

2

0,125

3

0,156

4

0,172

Na Tabela 2, a seguir, estão dispostos os valores obtidos dos cálculos para valor real da leitura, atividade da enzima/minuto, atividade da enzima/grama/minuto, atividade da enzima/μmol/grama/minuto e pH.

Tabela 2 – Valores obtidos para a atividade da enzima.

Amostra

Valor real da leitura

Ativ. da enzima/min

Ativ. da enzima/g/min

Ativ. da enzima/ μmol/g/min

pH

1

-0,948

-0,1896

-0,474

-474

3

2

-0,875

-0,175

-0,4375

-437,5

4

3

-0,844

-0,1688

-0,422

-422

5

4

-0,828

-0,1656

-0,414

-414

6

...

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