Determinação de Colesterol Total em soro

Universidade São Judas Tadeu

Bioquímica Clínica

Determinação de Colesterol total, Fração de HDL e Triglicerídeos em soro

São Paulo
2018

Introdução

O colesterol é um composto químico da família do álcool, a maior fração é sintetizada pelo fígado (em cerca de 75%), seu restante é adquirido através de dieta (aproximadamente 25%). Por ser lipossolúvel, o colesterol tem de ser transportado pela corrente sanguínea através de lipoproteínas: VLDL, LDL e HDL. O fígado acondiciona os triglicérides na forma de VLDL e os encaminha, pela corrente sanguínea as células, juntamente com menores quantidades de colesterol e proteínas.

As células armazenam e utilizam essa quantidade de lipídeos como fonte de energia. Assim, o VLDL, sem os triglicerídeos, passa a ser denominado como LDL, já que é composto basicamente de colesterol e proteínas. Seu excesso no organismo, acaba fixando-se nas paredes das artérias, entupindo-as e propiciando os ataques cardíacos ou infartos. Por sua vez, o HDL faz o papel contrário, extraindo o colesterol das paredes das artérias, devolvendo-o ao fígado para ser metabolizado.¹

Objetivo

Determinar o colesterol total em amostras de sangue, para investigar as dislipidemias e avaliar do risco de doença coronariana isquêmica.

Materiais e Métodos

1. Princípio do Método

[pic 1]              Figura 1. Método enzimático da colesterol oxidase

 

A determinação do colesterol por métodos enzimáticos combina a elevada especificidade da ação enzimática com a simplicidade operacional envolvida. Os ésteres do colesterol da amostra são hidrolisados pela colesterol esterase produzindo colesterol livre. Este, em presença da colesterol oxidase e de oxigênio, produz peróxido de hidrogênio, que pela ação da peroxidase em presença de um reagente fenólico, (fenol) e 4-aminoantipirina produz um composto corado (quinonimina) com máximo de absorção em 500 nm. A cor formada é proporcional à concentração de colesterol presente na amostra.³

1. Procedimentos Técnicos

Para realização do teste foram preparados 3 tubos de ensaio: B (branco), P (padrão) e T (teste).

[pic 2]

Os tubos foram homogeneizados e incubados em banho maria por 10 minutos a 37oC.
As absorbâncias foram lidas em espectrofotômetro a 510nm, após o aparelho ter sido zerado com o branco.

1. Cálculos e Resultados

Valores de referência para colesterol total: 130 a 200 mg/dL – Desejável
                                                                             200 a 240 mg/dL – Limítrofe
                                                                             acima de 240 mg/Dl – Hipercolesterolemia
                                                                             abaixo de 130 mg/Dl – Hipocolesterolemia 

Valores obtidos na realização dos testes

Absorbância do padrão: 0,264                          Absorbância do teste: 0,164

Conc. da amostra = Abs teste   x  200  
                                        Abs padrão

Conc. Da amostra = 0,164 x 200  = 124 mg/dL
                                         0,264

Determinação de Triglicerídeos em soro

Materiais e Métodos

1. Principio do método

[pic 3]

                             Figura 2. Método enzimático da lipase

Os triglicérides são hidrolisados pela lipase lipoprotéica e o glicerol liberado é fosforilado pela glicerolquinase formando glicerolfosfato que é oxidado a dihidroxiacetona e água oxigenada por ação da glicerol-3-fosfato oxidase. Através da reação catalisada pela peroxidase, a água oxigenada reage com a 4-aminoantipirina (4-AMP) e 4-clorofenol, produzindo a quinoneimina (vermelha) cuja absorbância, medida em 500 nm, é diretamente proporcional à concentração de triglicérides.²

1. Procedimentos técnicos

Para realização do teste foram preparados 3 tubos de ensaio: B (branco), P (padrão) e T (teste).

[pic 4]

Os tubos foram homogeneizados por 5 minutos e incubados em banho maria por 15 minutos a 37oC. As absorbâncias foram lidas em espectrofotômetro a 510nm, após o aparelho ter sido zerado com o branco.

1. Cálculos e Resultados

Valores de referência de triglicérides em soro:

< 10 anos de idade:                     Até 100 mg/dL – Desejável

10 a 19 anos de idade:                Até 130 mg/dL – Desejável

Adultos ( > 20 anos de idade):   150 mg/dL – Desejável
                                                       150 a 200 mg/dL - Limítrofe