PREPARO DE ANTIBIOGRAMA POR DISCO-DIFUSÃO EM ÁGAR

AULA PRÁTICA 2: PREPARO DE ANTIBIOGRAMA POR DISCO-DIFUSÃO EM ÁGAR (MÉTODO DE KIRBY BAUER) E DETECÇÃO DE BACTÉRIAS PRODUTORAS DE BETA-LACTAMASE DE ESPECTRO EXTENDIDO “ESBL”

INTRODUÇÃO

As beta-lactamase formam um grupo de enzimas que são capazes de hidrolisar o anel betalactâmico de penicilina, cefalosporinas e antibióticos betalactâmicos. A produção de ESBL é através dos plasmídeos que contém ampla resistência aos antimicrobianos que têm o anel beta-lactâmico em sua estrutura e agem no anel beta-lactâmico inativando assim o antibiótico. Pacientes com infecções por enterobactérias produtoras de ESBL não devem ser medicados com antibióticos betalactâmicos. A detecção da ESBL vem através dos antimicrobianos necessários para compor o conjunto de discos utilizados na rotina laboratorial em antibiogramas. As de espectro extendido são para agir sobre os antibióticos beta-lactâmicos de amplo espectro.

MATERIAIS E MÉTODOS

Placa de antibiograma

Alça de Bunsen

Àgar Mc Hinton

Pipeta Pasteur

Placa de petri com bactérias

Swab

Pinça

Antibióticos amoxicilina, ampicilina, cefalexina e outros de 10mg

Solução fisiológica

Para fazer a técnica de calibração em 0,5 McFarland foi feita a flambagem da alça de Bunsen e em seguida coletar um pouco de bactéria na placa de petri, inserir em tubo contendo soluçaõ fisiológica; verificar a turbidez da solução. Se estiver muito diluído, adicionar um pouco mais de bactéria da placa de petri e se estiver muito turvo adicionar um pouco de solução fisiológica.

Para fazer a semeadura, pipetar com pipeta Pasteur um pouco da solução fisiológica no meio da placa de petri, pegar o swab e espalhar na placa de antibiograma, espalhar de lado a lado, com estrias próximas, girar a placa 180 graus com as mãos, espalhar de lado a lado, girar a placa 90 graus com as mãos, espalhar de lado a lado.

Para fazer a distribuição dos discos, retirar a tampa de cada frasco de discos de antibióticos, flambar a boca do frasco no bico de Bunsen, flambar a pinça e depositar no disco e depois de coloca-lo flambar novamente a pinça.

OBS: O antibiótico vai junto com a bactéria.

Pegar as placas e incubar a placa invertida por 24H na estufa á 35ºC.

RESULTADOS

[pic 1] Placa contendo antibióticos

[pic 2] Antibióticos

[pic 3] Placa de Mc Hinton

[pic 4] Incubação dos discos

CONCLUSÃO

A técnica de preparo dos antibiogramas é utilizado na microbiologia clinica para o descobrimento da resistência das bactérias para poder iniciar o tratamento adequado e as medidas de isolamento dos pacientes, necessárias para se evitar a disseminação destes patógenos em surtos nosocomiais. Para saber se o paciente deverá ser isolado, deverá analisar a bactéria por meio da técnica de antibiogramas que analisará se a bactéria gram negativa ou positiva tem resistência em antibióticos como: Ampicilina, amicacina, amoxicilina, cefalotina, cefoxitina e entre outros.

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